Содержание

Раствор М200 | Цементно-песчаные смеси завода «Соржа»

РАСТВОР МАРКИ М200

Марка Морозостойкость F Марка по удобоукладке Цена за 1 м3 ( с НДС 20%)
Кладочный Монтажный
М200 75 Пк3 3070 руб

Завод «Соржа» предлагает строительным организациям и частным лицам Санкт-Петербурга и области приобрести готовый цементный раствор М200. Производство материала осуществляется непосредственно на предприятии в точном соответствии с нормативным технологическим процессом. Затем раствор марки М200 отгружается в автомобили, обустроенные бетономешалками, и отправляется на объект. Такой тип взаимодействия выгоден в первую очередь строителям, поскольку позволяет экономить рабочее время и выделенный бюджет.

Цементно песчаный раствор М200. Технические характеристики

Раствор М200 – один из наиболее востребованных материалов в современном строительстве. Его характеризуют в первую очередь прочность и надежность. Раствор М200 показывает лучшие технические характеристики в заводских условиях приготовления, так как производством занимается автоматизированное оборудование. Высокого качества невозможно добиться без добротного сырья. Цементно песчаный раствор М200 приготовляется из цемента, песка. По желанию заказчика, для улучшения качества и придания материалу особенных свойств в материал добавляются специальные компоненты.

Класс раствора кладочного М200Плотность материалаМорозостойкостьВодостойкостьПодвижностьВес 1м3
В152385 кг/м3F 200W6П3Около 2,4 тонны

В производстве раствора готового кладочного цементного марки 200 используется исключительно мытый песок и цемент М400 или М500. Пропорции компонентов зависят от марки цемента.

Раствор М200: для стяжки, несущих конструкций, фундамента и другого

Отличные эксплуатационные технические характеристики строительного цементного раствора М200 позволяют использовать его при выполнении следующих работ:

  • каменная и кирпичная кладка стен, перегородок, колон и прочих конструкций;
  • сооружение железобетонных бетонных элементов зданий и сооружений, в том числе фундамента;
  • оштукатуривание поверхностей в потенциально влажных помещениях, таких как подвалы;
  • оштукатуривание фасадов, в том числе цоколей;
  • строительство гидротехнических сооружений, в том числе колодцев, сливных систем и прочее.

Как купить раствор М200 в СПб

Завод «Соржа» реализует раствор М200 по цене за куб. Сформировать заказа вы можете несколькими способами:

  • позвонить в нашу компанию;
  • заказать на сайте обратный звонок;
  • заполнить форму на сайте;
  • посетить офис продаж.

В прайс листе на раствор М200 цена указана на покупку небольших объемов строительного материала. В случае заключения продолжительного контракта и поставок крупных партий предполагаются значительные скидки. В результате цена на цементно песчаный раствор М200 зависит от масштабов заказа. Условия и время доставки четко согласуется с клиентом. Наши производственные мощности позволяют заключать дополнительные контракты. Звоните, мы готовы к новому взаимовыгодному сотрудничеству!

Если остались вопросы, позвоните по телефонам +7 (812) 404-55-34 / 8-967-593-17-23 (Анна) или воспользуйтесь формой обратной связи. Наши специалисты помогут Вам!
Мы ждем ваших заявок!

Калькулятор расчета количества раствора

Другие марки раствора

Наши преимущества

Стабильное

качество

Проводим испытания бетона в собственной лаборатории

Низкие

цены

Оптовые цены на строительные материалы

Аренда

Спецтехники

Автобетононасосы и автобетоносмесители в наличии

Оперативная

доставка

Cвоевременная отгрузка бетона, соблюдаем сроки

Аккредитованная лаборатория

Доставляем бетон по СПб и ЛО

Реализованные объекты

Заливка фундамента под коттедж в Всеволожском районеСтроительство офисного здания в ЯниноСтроительство «СКА» арены у метро «Проспект Большевиков»Строительство жилого комплекса по Кондратьевскому проспектуСтроительство коттеджей в поселке МанушкиноСтроительство детского садика в Красногвардейском районе

Остались вопросы?

Пропорции цементно-песчаного раствора

Строительный состав, в который входят цемент, песок, является основополагающим компонентом как для возведения фундамента, так и для кладки стен из кирпича и оштукатуривания поверхностей, а также для общестроительных работ. В зависимости от области применения и выбирается соотношение ингредиентов. Это могут быть как простые, так и многокомпонентные составы. Цемент в чистом виде не применяется, так как после затвердевания он становится очень хрупким. Для кирпичной кладки используется известковый или цементно-песчаный состав, состоящий из значительного количества компонентов. Известковый состав уступает по показателям прочности цементно-песчаным составам. Раствором штукатурки обрабатываются стены для выравнивания, штукатурка толщиной более 5 см наносится на стену, на которую предварительно закреплена армированная сетка.

При приготовлении смеси с добавлением песка прочность состава увеличивается, но тем самым снижаются пластичные свойства раствора.

Марка цемента, наиболее часто применяемая для приготовления смеси, — М100. Используется она для строительства стен из кирпича, шлако- и пеноблоков, а также для общеремонтных работ.

Марка М150 с добавлением мелкого наполнителя используется для приготовления строительной штукатурки, в которую дополнительно добавляется известь. Для придания эластичности к цементно-песчаному раствору добавляется глина.

При приготовлении смеси, когда добавляется песок, прочность состава увеличивается, снижая тем самым пластичные свойства раствора.

Наиболее распространенная пропорция песка и цемента — 3:1. Классический состав приготовляется путем смешивания сухих компонентов, затем добавляется в него вода небольшими порциями до консистенции сметаны, после этого происходит процесс загустения в течение 15 мин. Когда смесь готова, ее нужно тщательно перемешать. Для качества состава не следует добавлять в него воду после того, как раствор начинает застывать, лучше готовить небольшими порциями по 5-6 л для большого объема работ на 1,5 часа. Для смешивания используется строительный миксер или дрель с насадками. При перемешивании не должно оставаться комков, масса должна быть однородной.

Инструменты для работы

  • Емкость для приготовления. Это может быть как поддон, так и растворомешалка или бетономешалка. Если перемешивать вручную в емкости прямоугольной формы, песок и цемент могут застаиваться в углах, не получится однородная масса;
  • Лопата для накладывания песка и цемента;
  • Ведро — как мера частей пропорции;
  • Дрель или строительный миксер для перемешивания состава в небольших количествах;
  • Строительный конус для определения подвижности раствора.

Требования к раствору

Таблица состава цементно-песчаного раствора.

Цемент в растворе является вяжущим компонентом, а песок — заполнителем, в свою очередь, вода — основа, она должна быть чистой, без загрязнений, масляных и кислотных примесей. Песок должен быть без примесей каких-либо других пород и глины, лучший вариант — это речной песок. Песок для приготовления состава для кирпичной кладки слишком мелкой фракции способствует растеканию раствора, а крупные частицы препятствуют выравниванию поверхности, появится необходимость дополнительной шлифовки и штукатурки поверхности стен.

Цемент для фундамента выбирается марки не ниже М300, если это тяжелое монолитное строительство, то берется марка М400. Упаковка цемента должна быть бумажной. Цемент имеет свойство слеживаться при длительном хранении, поэтому покупать его следует непосредственно перед началом работ.

Для придания смеси необходимого цвета, например для кладки кирпичной стены, в него добавляется сажа, но в небольшом количестве, так как она уменьшает прочность раствора.

Пропорции смеси

При строительстве фундамента выбирается марка цемента не ниже М300, если это тяжелое монолитное строительство, то берется марка М400.

Для приготовления смеси для кладки стен (М100) необходимо взять цемент М400 и смешать с песком в пропорции 1:4. Используется такая смесь для укладки блоков из ракушечника и шлакоблока. Раствор М200 получается в пропорции 1 часть цемента М400 и 2 части песка.

Для выравнивания неровностей и для предварительной подготовки поверхности к облицовке используются цемент марки М400 или М500, песок и вода в соотношении 1:3:0,5. Штукатурка готовится в такой пропорции, если цемента добавить более 1 части, то время затвердевания уменьшается.

Если используется кирпич марки 75, то и раствор можно сделать марки 75, для этого берется пропорция 1:5:3, за меру одной части для удобства используется ведро с мерной шкалой.

Для проведения отделки стен берется соотношение цемента, песка и известкового молока 1:5:2.

Стандарты технологии регламентируют нормы соотношения материалов. Для половой стяжки в помещении 1:2-1:6. Для обычных строящихся конструкций берется соотношение от 1:3 до 1:6. В бытовом малоэтажном строительстве распространена пропорция 1:3 и 1:4.

При добавлении воды можно ошибиться, так как песок может быть мокрым, и раствор может получиться жидким, поэтому нужно добавить немного цемента и песка в той же пропорции.

Для укладки плитки пользуются раствором в соотношении цемента, песка и воды — 1:2,4:0,4. Чтобы проверить полученную консистенцию, необходимо взять небольшое количество состава, распределить по тыльной стороне плитки и встряхнуть, перевернув. Если слой смеси остался на поверхности плитки толщиной не менее 3 мм, то состав готов, если вся масса не удержалась, следует добавить еще песка и цемента в тех же пропорциях. Для увлажнения тыльной — обратной — стороны плитки готовится цементное молоко в отношении 1 часть цемента и 3-4 части воды. Раствором предварительно обрабатывается каждая плитка.

Добавки для улучшения

Таблица прочностных показателей цементно-песчаного раствора.

Сложным раствором называется состав с применением пластификаторов, он проверяется по такому показателю, как подвижность, с помощью специального конуса, погруженного в состав. В растворе с добавками также должны быть соблюдены пропорции. Подвижность определяется как среднеарифметическое двух показателей шкал.

  1. Известь применяется в гашеном виде, для этого добавляется вода. В зависимости от количества воды образуется три состояния извести: пушонка (≈ 75 % оксида кальция и ≈ 25 % воды), известковое тесто (воды потребуется больше в 10, чем для приготовления пушонки) и известковая вода (слабый раствор извести в воде). Гашение производится за 2 недели до производства строительных работ, во избежание деформации и целостности состава. Раствор с применением извести обладает улучшенной паропроницаемостью и прочностью.
  2. Клей ПВА добавляется для улучшения адгезийных свойств смеси и придания эластичности, эти свойства незаменимы при штукатурке поверхности стен.
  3. Моющее средство для посуды или жидкое мыло придает эластичность. Добавляется после воды ≈ 50-100 гр. Если переборщить, раствор получится слишком вспененный, пузырьки мыла дают такой эффект. Штукатурка будет ложиться ровнее.
  4. Сажа или графит используется для окраски штукатурки.

Расход компонентов

Если используется классическая пропорция 1:3 для штукатурки стен, то цемента расходуется 0,005 кв. м на единицу площади поверхности, а песка — 0,015 кв. м. Таким образом, для 1 кв. м площади поверхности понадобится 0,02 кв. м штукатурки.

соотношение песка и цемента в растворе для кладки кирпича, состав и приготовление, как замесить смесь

Цементный раствор является основополагающим компонентом, необходимым для разных строительных целей: для штукатурки стен, для возведения фундамента, для кладки кирпича и т.д. Именно точное понимание той области применения раствора и влияет на определенные пропорции цементно-песчаной смеси, а также прочих ингредиентов, входящих в состав. Цемент без каких-либо добавок не применяется, ведь после затвердевания он оказывается очень хрупким.

Основные составляющие цементного раствора – вода, песок и цемент

Раствор цемента представляет собой вязкую смесь, с помощью которой осуществляется крепление каких-либо деталей друг к другу.

Раствор может использоваться в монолитном строительстве, но здесь необходимо использование более высокой марки цемента.

Основой любого цементного раствора является сочетание незаменимых ингредиентов:

  • собственно, сам цемент, который выступает в роли вяжущего вещества;

Цемент

  • песок, выполняющий роль заполнителя;

Песок

  • вода используется для разбавления сухих веществ с целью придания им определенной консистенции.

Помимо наличия этих основных составляющих, качество раствора цемента зависит от их качества. К воде нет определенных строгих требований, кроме ее чистоты. В ней не должно присутствовать лишних примесей, грязи, масла и т.д.

Если на месте строительства отсутствует система водоснабжения, то наилучшим вариантом будет приобретенная вода в магазинах.

Большинство специалистов склоняются к использованию речного песка, который отличается отсутствием примесей, камней и глины. Допускается также использование карьерного песка, но после предварительной очистки и промывки.

А вот морской песок оказывается полностью непригодным для использования. Дело в том, что в нем содержится большое количество соли, которую сложно вымыть из состава, что негативно сказывается на связывании всех компонентов смеси.

Морской песок

Главным элементом раствора является цемент, от качества которого во многом и зависит качество всей смеси. Существует множество марок цемента, начиная от 100 и заканчивая 600.

Чем больше число, тем большую нагрузку может выдержать застывший раствор, что является очень важным показателем в различных строительных областях.

Для фундамента понадобятся более высокие марки цемента – М400, М500 и т.д. А вот для кладки облицовочного кирпича, для штукатурки стен и других подобных работ, вполне подойдут марки М100 и М200.

Пропорции раствора цемента

Сначала хотелось бы разобраться с типами самого цементного раствора. Они бывают нескольких видов:

  • нормальный;
  • тощий;
  • жирный.

Подобная классификация является следствием разного количества жидкости, которую используют для разбавления сухих ингредиентов раствора.

Жирный раствор получается в результате использования небольшого количества воды. С одной стороны, смесь очень быстро схватывается, но с другой – после затвердевания смесь может потрескаться с течением времени, что негативно сказывается на сроке эксплуатации постройки.

Тощий раствор, напротив, готовится с большим количеством воды. Характеристики готового раствора оставляют желать лучшего, да и время схватывания смеси значительно увеличивается.

Наилучшим вариантом является нормальный раствор, в котором соблюдены гармоничные пропорции всех составляющих – цемента, песка и жидкости. После затвердения такой раствор не рассыпается и не трескается, что делает строительные объекты достаточно долговечными.

Пропорции

Самым распространенным вариантом раствора является сочетание цемента с песком (1:3). Хотите знать как замесить такой раствор? В в этом нет ничего сложного. Взяв три части песка, смешиваем их с одной частью цемента в отдельной емкости.

Тщательно перемешиваем, чтобы сухая смесь стала одного оттенка. Затем можно начать добавлять воду, одновременно перемешивая смесь с помощью лопаты или электрической дрели с насадкой.

Подготовка раствора

Готовый раствор должен напоминать по консистенции густую сметану, поэтому после смешивания сухих ингредиентов, добавление воды осуществляется небольшими порциями. В среднем, объем жидкости оставляет половину объема цемента, но это приблизительная пропорция.

Также стоит отметить тот факт, что марка готового цементного раствора и марка цемента – это разные понятия.

Марка раствора представляет собой марку цемента, поделенную на объем используемого наполнителя, т.е. песка.

Так, чтоб замешать раствор марки М100 нам понадобятся следующие компоненты:

  • цемент марки М300;
  • три ведра песка.

Но это не значит, что цементный раствор марки М100 готовится только из цемента маркировки М300.

М300

Если в наличии цемент М400, то для приготовления раствора понадобится четыре ведра песка (соотношение 1 к 4). Если цемент М500, то пять ведер (соотношение 1 к 5) и т.д.

Мы уже говорили о том, что цементный раствор используется для самых различных строительных целей. Соответственно, и пропорции песка и цемента, а также других составляющих раствора, будут разными для каждого из конкретных областей применения. Рассмотрим каждый из них более подробно.

Как замесить для фундамента

Фундамент является определяющим момент в строительстве любого строительного объекта, от которого напрямую зависеть эксплуатационный срок. Именно поэтому, очень важно в точности соблюдать пропорции раствора для фундамента.

Для фундамента

Качественный фундамент должен состоять не только из традиционных компонентов раствора – песка, цемента и воды, но и щебня. Он не должен быть известняковым, ведь это не способствует увеличению прочности готового раствора. Также не стоит заменять щебень керамзитом, гравием и прочими подобными материалами.

В большинстве случаев, для изготовления фундамента используется цемент марок М400 и М500. Для основания здания крайне важна прочность, поэтому использование высоких марок цемента вполне оправдано.

М500

Что касается песка и воды, то здесь требования абсолютно идентичные с теми, которые предъявляют к обычному цементному раствору, используемому для штукатурки стен, кладки кирпича и т.д. Вода не должна содержать примесей, масел и инородных предметов.

Стеновые панели для ванной довольно просто устанавливать, они достаточно прочные, легко справляются с перепадом температур и имеют большой срок службы. Тут все об этом прекрасном материале.

При помощи самовыравнивающейся стяжки для пола вы сможете к минимуму свести все сложности его выравнивания. Здесь можно узнать о различных видах и стоимости самовыравнивающейся стяжки.

Свое широкое распространение карьерный песок приобрел благодаря своей низкой себестоимости и прекрасным природным качествам. Перейдя по ссылке ознакомитесь с техническими характеристиками данного материала.

Песок нужно брать промытый и просеянный, чтобы в нем не было следов глины, камней, илистых образований и т.д.

Пропорции песка и цемента для приготовления раствора для фундамента следующие – на одно ведро цемента берется три ведра песка.

Что касается щебня, то в большинстве случаев оно идентично количеству песка. Если измерять все ведрами, то на одно ведро цемента М400 или М500 понадобится три ведра щебня и три ведра песка.

Щебень

Водой нужно разбавлять осторожно, чтобы не сделать раствор слишком жидким. Здесь очень важно насколько сухой песок у нас в наличии, т.е. если он мокрый, то желательно его просушить перед смешиванием с остальными ингредиентами.

Состав раствора для стяжки пола, как замешать

Пропорции и расход цементного раствора для стяжки определяются на основании марки цемента, имеющегося в наличии. Минимально допустимая марка раствора для стяжки пола составляет М 150 (сухая смесь), но довольно часто используется марка М200.

М200

Вообще, песчано-цементная или бетонная стяжка может использоваться как самостоятельное напольное покрытие в определенных помещениях. Как правило, это гаражи и прочие нежилые постройки. В большинстве же случаев, стяжка используется как основа для линолеума, паркета и прочих покрытий.

Цементный раствор для стяжки пола включает в себя три основных составляющих – песок, цемент и жидкость.

Бетонная стяжка дополняется еще и щебнем, но она практически не используется для жилых помещений, поэтому рассматривать ее мы не будем.

Для стяжки пола

Пропорции цементно-песчаной смеси

Пропорции такого песчано-цементного раствора достаточно традиционны. Цемент и песок берутся в соотношение 1 к 3. Что касается воды, то ее должно быть вдвое больше количества цемента.

К примеру, если мы делаем из цемента раствор для стяжки марки М150, то на одну его часть приходится треть песка и 0,5 воды. Дабы сделать раствор М200 надо 0,4 части воды и 2,8 части песка при таком же количестве цемента.

Приготовление и соотношение составляющих цементно – известкового раствора для кладки облицовочного кирпича

Цементный раствор для кладки кирпича мало чем отличается от растворов, используемых в других строительных целях. Различаются только пропорции, некоторые добавки, но основные составляющие остаются прежними.

Как раствор может применяться цементная и известковая также смесь. Пропорции зависят от того, какая марка раствора нам требуется. К примеру, для изготовления раствора марки М100, нам понадобится цемент марки М300 и 3,4 части песка.

Для кладки кирпича

Если в наличии цемент М500, то для получения такого раствора нам понадобится 5,3 части песка. В принципе, здесь также действует формула расчета марки раствора, т.е. марка цемента, деленная на количество песка.

Пластификатор – можно ли добавлять известковое молоко или ПВА

Многие специалисты советуют добавлять к данным составляющим известковое молоко, что способствует увеличению пластичности смеси. Так, для получения раствора марки М25 нам понадобится по одной части известкового молока и цемента, а также четыре части песка.

Раствор цемента для кладки облицовочного кирпича включает в себя некоторые дополнения в виде пластификаторов. Они используются вместо извести, что положительно сказывается на результатах работы.

Так, добавление небольшого количества этих добавок позволяет предотвратить появление трещин, улучшает адгезию и т.д.

Пропорции примерно следующие: на одну часть цемента используется не более 0,3 части пластификаторов. В данной роли может выступать клей ПВА в цементном растворе. Кроме того, можно сделать пластификатор для цементного раствора своими руками.

Для этого нам потребуются следующие материалы: шампунь, мыло в жидком виде и разбавленный стиральный порошок. Пропорции могут быть различными. К примеру, на 50 кг мешок цемента используется порядка 200 мл жидкого мыла.

Более подробно о том, как приготовить раствор для кладки кирпича смотрите на видео:

Что добавлять и как приготовить своими руками смесь для штукатурки стен

Раствор для штукатурки представляет собой сочетание традиционных составляющих цементного раствора, а также определенных дополнений, улучшающих свойства смеси. Такими дополнительными материалами могут выступать глина или известь, в зависимости от производимых работ.

Цементный раствор для штукатурки стен может содержать самые различные пропорции.

На одну часть цемента может приходиться от одной до шести частей песка. Но оптимальным является соблюдение пропорции один к трем, с добавлением нужного количества воды.

Цементно-известковый раствор для оштукатуривания включает в себя более разнообразные варианты пропорций. Вот одни из наиболее распространенных: 2 части извести и 8 частей песка, или 2 части извести и 9 частей песка.

Цементно-известковый раствор

Данное количество материалов рассчитывается из соотношения на одну часть цемента. Многие интересуются – как приготовить цементно-известковый раствор для штукатурки? Наиболее распространенный способ заключается в предварительном смешивании песка и цемента.

Только потом добавляется известковое молоко, которое изготавливается путем смешивания воды и известкового теста.

Использование жидкого стекла

Жидкое стекло представляет собой смесь силиката натрия и воды.

Жидкое стекло

В цементом растворе оно применяется для следующих целей:

  • для улучшения гидроизоляции;
  • для увеличения характеристик прочности стяжки;
  • для увеличения жаростойкости поверхности при оштукатуривании;
  • для заполнения трещин и прочих пустот.

Цементный раствор с жидким стеклом готовится с использованием следующих пропорций:

  • в целях гидроизоляции – 4 части цемента, 4 части песка и 1 часть жидкого стекла;
  • для заделки трещин – 3 части цемента, 1 часть песка и 1 часть жидкого стекла;
  • для повышения огнеупорности поверхностей – 4 части цемента, 1,5 части песка и жидкого стекла.

Как мы видим, пропорция жидкого стекла в цементом растворе напрямую зависит от сферы применения готовой смеси. Что касается пропорции воды, то она не должна превышать 25 процентов от количества жидкого стекла.

Пропорции цемента и песка в приготовлении цементных растворов являются одним из определяющих моментов. От соблюдения правильного соотношения будут зависеть характеристики готовой смеси, поэтому нужно знать подобные нюансы еще до этапа строительства.

Как сделать раствор цемента пропорции?

Строительные технологии в лице соответствующих ГОСТов, в зависимости от назначения,  регламентируют несколько видов растворов на основе цемента. В то ж время, основные его составляющие постоянны, это:

  • Цемент, различных марок, как связующий материал.
  • Просеянный речной или намывной песок, как наполнитель.
  • Щебень различных видов и фракций, повышающий прочность.
  • Вода, как элемент смешивания, затворения и придания сухой смеси свойств раствора.

Кроме основных компонентов в раствор могут добавляться присадки (пластификаторы или отвердители), а щебень заменяться известью (цементно-известковые растворы).

Рецепт строительного раствора

Классический вариант раствора для общестроительных работ соответствует следующим пропорциям:

  • Цемент – 1 часть.
  • Песок – 1,1 части.
  • Щебень – 2,5 части.

По такому соотношению готовится бетонный раствор марки М450, отличающийся высокой прочностью и предназначенный для строительства конструкций испытывающих нагрузку в 450 кг/см2 и более.

Учитывая указанные пропорции, для производства 1 м3 материала понадобится 470 кг цемента ходовой марки М400 (9 стандартных мешков массой 50 кг+20 кг), 517 кг речного просеянного песка и 1 176 кг щебенки.

Если фундамент или другая бетонная конструкция будет нагружаться величиной менее 450 кг/см2, то для приготовления раствора для ее возведения рекомендуется использовать бетоны низших марок, замешиваемые в следующих пропорциях:

  • Бетон М100: 183 кг цемента марки М400 (3 мешка по 50 кг +30 кг), песок – 842 кг, щебень – 1282 кг.
  • Бетон М200: 264 кг цемента марки М400 (5 мешков+14 кг), песок – 738 кг, щебень – 1265 кг.
  • Бетон М300: 338 кг цемента марок М400 (6 мешков по 50 кг +38 кг), песок – 642 кг, щебень – 1250 кг.

Специальные виды цементных растворов

Пропорции цементно-известковых растворов предназначенных для возведения надземных объектов с возможной относительной влажностью воздуха внутри помещений до 60%, а также для строительства фундаментов в грунтах с небольшой влажностью.

  • Раствор марки М10 на основе цемента М150 – 1 часть связующего, 1,2 части извести, 9,5 частей песка.
  • Раствор марки М50 на основе цемента М200 – 1 часть связующего, 0,3 части извести, 4 части песка.
  • Раствор марки М100 на основе цемента М500 – 1 часть связующего, 0,5 части извести, 5,5 частей песка.
  • Раствор марки М150 на основе цемента М400 – 1 часть связующего, 0,2 части извести, 3 части песка.
  • Раствор марки М200 на основе цемента М400 – 1 часть связующего, 0,1 часть извести, 2,5 части песка.

Пропорции цементно-известковых растворов для строительства надземных зданий с возможной относительной влажностью более 60%, а также для конструкций, возводимых во влажных грунтах.

  • Раствор марки М10 на основе цемента М150 – 1 часть связующего, 1 часть извести, 9 частей песка.
  • Раствор марки М50 на основе цемента М300 – 1 часть связующего , 0,6 частей извести, 6 частей печка.
  • Раствор М100 на основе цемента М400 – 1 часть связующего, 0,4 части извести, 4,5 части песка.
  • Раствор М150 на основе цемента М500 – 1 часть связующего, 0,3 части извести, 4 части песка.
  • Раствор М300 на основе цемента М400 – 1 часть связующего, 0,7 частей извести, 1,8 частей песка.

Цементный раствор М200 — Вик Бетон

Цементный раствор М200 представляет собой сочетание песка и цемента. Каждый компонент находится в определенных пропорциях и обладает конкретными свойствами. Благодаря этому строительный материал хорошо подходит для создания важных нагружаемый объектов, при формировании которых требуется применять только качественное сырьё.


Положительные стороны

Если речь идет о положительных сторонах, то цементный раствор М200, купить в Калининграде который можно недорого, полностью отвечает высоким требованиям, предъявляемым к качеству и надежности. Высокие эксплуатационные свойства обеспечиваются благодаря четкому соблюдению государственных стандартов. В число характерных плюсов входят:

  1. Высокие показатели прочности. Строительный материал соответствует категории В15. Это значит, что поверхность без потери целостности может выдерживать вес до 150 кг, приходящийся на 1 квадратный сантиметр. Именно благодаря этому свойству раствор может использоваться для решения широкого спектра строительных задач.
  2. Водостойкость. По этому показателю цементный раствор соответствует категории W6. Это говорит об умеренной влагопроницаемости. Материал не впитывает в себя воду, а для усиления подобного свойства рекомендуется использовать дополнительные гидрофобизирующие вещества.
  3. Морозостойкость. По этому показателю цементный раствор соответствует категории F75. Материал способен выдержать 75 циклов полной заморозки, сохраняя первоначальную прочность, а также устойчивость к нагрузкам.

Ещё в число характерных преимуществ входит степень подвижности, соответствующая категории П3, а также плотность материала, показатель которой равен 2,375 тонн на кубический метр.

Применение

Описанные выше положительные стороны, а также эксплуатационные характеристики цементного раствора М200, в Калининграде заказать который можно с доставкой, дают возможность задействовать его в следующих сферах:

  • При изготовлении декоративных элементов, устанавливаемых на фасадах. Если обеспечить достаточный уровень вязкости и правильные пропорции воды, то с использованием подобного раствора можно сформировать разнообразные украшения, хорошо вписывающиеся в экстерьер конкретного строения. Элементы декора сохраняют изначальные эстетические качества благодаря стойкости к влиянию влаги, прочности.
  • Для строительства многоэтажных частных домов. Цементный раствор может использоваться подобным образом, если при его замешивании добавить в смесь щебень в определенной пропорции.
  • При формировании стяжки пола при толщине слоя не менее 1 см. Поверхность получается очень ровной, а после полного затвердевания обеспечиваются хорошие показатели адгезией.
  • При формировании бортиков во время обустройства дорожек и стоянок для транспортных средств.
  • Для создания дополнительной гидроизоляции. Использование подобным образом обеспечивается за счет высокой плотности, водонепроницаемости, благодаря которой присутствуют плохие показатели влаговпитываемости.

Чтобы купить цементный раствор М200 в Калининграде, можно отправить заявку на сайте, позвонить по номеру на основной странице.

Вес, объем и пропорции цемента для изготовления строительных растворов

При замешивании цементного раствора неудобно пользоваться рецептурой ГОСТ, где компоненты указаны в долевом соотношении друг к другу. Удобнее использовать привычные меры: мешки или килограммы. Тогда рецепт раствора становится простым и понятным и, смешав все компоненты можно получить материал с заданными техническими характеристиками.

Сколько кг цемента в одном мешке или кубическом метре? Какой объем занимает 1 мешок сухого цемента? Эти вопросы актуальны при расчете стройматериалов, при выборе, т. к. фасовка бывает разной, а ;также при подборе транспорта для доставки. Каждая марка сухого цемента имеет свой вес, а значит и соотношение компонентов при замешивании цементно-песчаного раствора будет разным.

От чего зависит вес цемента?

Удельный вес строительного материала по СНиП II-3-79 — это физическая величина, показывающая отношение веса материала к объему, которое он занимает. Сухой цемент занимает значительно меньше места, чем цементный раствор, поэтому из одного килограмма цементного вяжущего получится несколько кг цементно-песчаной смеси.

Удельный вес цемента зависит от многих факторов:

  • марки и состава;
  • степени помола компонентов;
  • способа производства;
  • длительности хранения.

Вес свежего цементного порошка (при условии соблюдения температурного и влажностного режима хранения) составляет 1200 кг/м3. Это минимальный показатель, обусловленный тем, что частицы свежепомолотого материала имеют положительный и отрицательные электрические заряды. За счет разности зарядов частицы отталкиваются друг от друга, плотность порошка уменьшается, а значит, снижаются весовые показатели.

В дальнейшем цементный порошок фасуется, транспортируется, хранится. Электрические заряды исчезают, уходит вовлеченный при производстве воздух и плотность материала повышается. Строители говорят: цемент слёживается. В среднем вес одного кубометра вяжущего через полгода после выпуска при правильном хранении составляет 1550 кг.

При нарушении условий хранения материал может впитывать влагу, что приводит к повышению плотности и соответственно веса. Чем мельче помол порошка, тем больше воды он впитывает и тем больше его масса. Учитывая, что мелкий помол имеют высокие марки цемента, то чем выше марка, тем требовательнее материал к условиям хранения. В зависимости от марки один кубический метр (м3) цемента может давать разницу при взвешивании до 400 кг/м3. Именно поэтому при приготовлении раствора учитывается не только вес, но и марка. Например, для марки М200 соотношение цемент/песок будет 1 к 3, а при использовании марки М400 — 1 к 2,2.

При грубых расчетах строители используют средний показатель — 1300 кг/м3. Исходя из этого, можно рассчитать, что стандартный мешок на 50 кг содержит примерно 0.04 м3 сухого вяжущего. Параметр имеет решающее значение при заказе транспорта для доставки стройматериалов, т. к. вместимость машины или объем багажника всегда считается в м3 или литрах.

Пропорции цементных растворов

Вес мешка с цементом указан на таре, а вот о плотности производители умалчивают. При этом плотность порошка может изменяться даже в пределах одной марки до 50% в зависимости от условий и продолжительности хранения. Для приготовления цементно-песчаного раствора или бетонной смеси нужно научиться одну величину переводить в другую.

Для замешивания бетона на основе портландцемента М500 пропорция компонентов по ГОСТ 27006-2019 будет такой:

  • 1 часть вяжущего;
  • 2 части мелкого наполнителя;
  • 4 части крупного заполнителя.

Из рецептурного соотношения легко определить объем каждого компонента. Для этого нужно общий объем раствора разделить на количество частей. Например, если нужен 1 м3 смеси, то одна часть — это 1/7 = 0,142 м3. То есть 1 часть любого из компонентов равна этому показателю. Учитывая, что плотность цемента 1300 кг/м3 рецептура в привычных килограммах будет выглядеть следующим образом:

  • 184 кг вяжущего или 3,68 мешка по 50 кг;
  • 213 кг мелкого наполнителя;
  • 197 кг крупного заполнителя (гравия).

Если используется другой крупный заполнитель, то ;вес последнего компонента будет отличаться: гранит — 192 кг, известняк — 183 кг, бут — 213 кг, базальт — 241 кг.

Для расчета количества мешков цемента нужно полученный вес разделить на количество килограммов в мешке. Например, для замешивания 1 кубометра бетона потребуется 4 мешка по 50 кг или 8 мешков по 25 кг.

Где взять рецепты бетонных смесей и ЦПС для составления пропорции компонентов и расчета? Рецептура для каждого типа раствора рассчитывается индивидуально, но обязательно с учетом ГОСТ 27006-2019. Рецепт должен быть таким, чтобы обеспечить приготовление раствора с заданными техническими характеристиками.

Основные виды растворов готовят по такой рецептуре с соотношением цемент/песок/щебень:

  1. Бетон М100 — 1/4,5/7 на портландцементе М400 или 1/5.8/8 на портландцементе М500.
  2. Бетон М250 — 1/2/4 на портландцементе М400 или 1/2,5/4,5 на портландцементе М500.
  3. Бетон М400 — 1/2,3/7 на портландцементе М400 или 1/1,5/3,2 на портландцементе М500.

Эту рецептуру можно использовать для производства товарного бетона, применяемого при строительстве домов, заливки фундаментов и чаш бассейнов, тротуарных дорожек, изготовления бордюрного камня, буронабивных свай.

Сколько весит 1 куб готового раствора?

Вес одного кубометра готового строительного раствора имеет значение при его транспортировке или подачи на высоту, когда подбирается грузоподъемность автомобиля или производительность бетононасоса. Вес жидкого бетона и цементно-песчаного раствора зависит от плотности компонентов, входящих в его состав и пропорции, в которой они использовались. При использовании тяжелых крупных заполнителей, таких как гранит, базальт, магнетит вес 1 м3 бетонной смеси может в 2-3 раз отличаться от массы раствора, замешанного на гравии.

Средний вес 1 кубического метра бетонной смеси по ГОСТ 7473-2010, замешанного на гранитном заполнителе, в зависимости от марки и класса прочности будет следующим:

  • М100 (В7.5) — 2494 кг;
  • М200 (В15) — 2432 кг;
  • М250 (В20) — 2348 кг;
  • М300 (В22,5) — 2389 кг;
  • М350 (В25) — 2502 кг;
  • М400 (В30) — 2376 кг;
  • М500 (В40) — 2980 кг.

Вес 1 м3 бетонного раствора, замешанного на других заполнителях по СНиП II-3-79:

  • железобетон — 2500 кг;
  • туфобетон — 1200…1400 кг;
  • пемзобетон — 800…1600 кг;
  • на вулканическом шлаке — 800…1600 кг;
  • керамзитопенобетон — 500…1800 кг;
  • шунгизитобетон — 100…1400 кг;
  • перлитобетон — 600…1200 кг;
  • термозитобетон — 1000…1800 кг;
  • на доменных гранулированных шлаках — 1200 кг;
  • вермикулитобетон — 800…1000 кг;
  • газо-, пенобетон, пеносиликат — 300…1100 кг.

Вес 1 куба строительных растворов по СНиП II-3-79 составляет:

  • цементно-песчаный (ЦПС) — 1800 кг;
  • цементно-песчано-известковый — 1700 кг;
  • известково-песчаный — 1600 кг;
  • цементно-шлаковый — 1400 кг;
  • гипсовый — 1000 кг.

Расчет цемента для транспортировки

При транспортировке мешков цемента или насыпного порошка важно знать, сколько материала поместиться в той или иной машине. Например, для перевозки 10 м3 цемента потребуется два КАМАЗа грузоподъемностью 7 тонн или один 15-тонник.

Не менее важное значение имеет транспортировка материалов непосредственно на стройплощадке. При отсутствии бетононасоса материалы для замешивания раствора подаются, как правило, ведрами. Один кубический метр сухого цемента — это 84 10-литровых ведра или 50 20-литровые бадьи.

Для расчета того, сколько мешков можно привести в багажнике легкового автомобиля, нужно знать объем 1 мешка и вместимость багажника. Удельная плотность сухого цементного порошка — это вес 1 м3 материала. Средний показатель плотности составляет 1300 кг/м3. Для определения объема цемента в 50-киллограмовом мешке нужно решить пропорцию:

1300 кг/м3 — 100%

50 кг — Х%, отсюда Х = 3,85%. Именно такой процент от 1 кубометра содержится в мешке. Берем полученный процент от кубометра и получаем величину в привычных кубометрах — 0,0385 м3 или 38,5 литров. Зная объем багажника машины, можно рассчитать, сколько мешков туда теоретически можно загрузить. Именно теоретически, т. к. в реальных условиях нужно учитывать грузоподъемность автомобиля и способ укладки мешков с цементом.

Фасовка цемента

Производители фасуют цемент в мешки по 5, 10, 25 и 50 кг, давая покупателю возможность выбрать наиболее удобный и экономичный вариант. Если при расчете пропорции получилось, что для строительно-монтажных работ нужно 5,2 мешка цемента по 50 кг, то целесообразно купить 5 мешков по 50 и один 10 кг. При расчетах не нужно забывать о технологических потерях и к любому полученному результату прибавлять 5-7%.

Сколько воды нужно для раствора цемента

Автор Евгения На чтение 22 мин. Опубликовано

Сколько воды нужно для раствора цемента

Цементный раствор.

Цементный раствор – это, наверное, самый важный элемент в качественном строительстве. На первый взгляд кажется, что приготовить такую смесь проще простого. По большому счету, это верное предположение. Но, для получения первоклассного цементного раствора стоит очень внимательно подойти к подбору компонентного состава и оптимальной пропорций. Перед тем как познать тонкости получения подобного стройматериала, давайте выясним функции каждого из компонентов в его образовании. Онлайн расчет состава цементного раствора.

Цементно-песчаный раствор.

С технической точки зрения, основу раствора составляет вода. Поэтому, лучше брать чистую без содержания каких-либо примесей воду. Наполнителем в растворе выступает песок, а связывает все компоненты воедино цемент. В процессе получения цементного раствора нужно тщательно подойти к вопросу качества песка. Во-первых, стоит убедиться в отсутствии глины и других пород, мусора. Во-вторых, подобрать правильный посев песка. Например, мелкодисперсный песок лучше использовать для кирпичной кладки, а грубый песок в штукатурных работах может стать причиной дополнительной шлифовки или выравнивания.

Выбирая цемент нужно учитывать некоторые его особенности. Во-первых, при долгом хранение даже нераспечатанный цемент может закаменеть и стать непригодным к работе. Поэтому, разумнее будет купить цемент перед стартом работ. Во-вторых, цемент должен быть только в бумажной упаковке. Немаловажно подобрать правильную марку цемента в зависимости от вида строительных работ. Например, для фундамента нельзя использовать цемент с маркой ниже М300.

Рассмотрим рекомендации и стандарты приготовление цементно-песчаного раствора в зависимости от вида работ. Цемент марки М400 используется при строительстве массивных цельных строений нужно использовать цемент М400. Если смешать цемент М400 и песок в соотношении 1:2, то получим состав М200. Для отделочных работ, подготовке поверхности к облицовке желательно брать для смеси цемент М400 или М500, песок и воду в соотношении 1:3:0,5. Если увеличить относительную долю цемента в растворе, то можно сократить время затвердения штукатурки. Также хороший результат получают при соотношении цемента, песка и известкового молока 1:5:2 в штукатурных работах, а для половой стяжки – при соотношении 1:2-1:6. При построении рядовых стоячих построек оптимальным является соотношение от 1:3 до 1:6. В быту же популярны пропорции – 1:3 и 1:4.

Свойства цементных растворов.

При работе с кирпичом, например, марки 75 отлично подойдет цементный раствор марки 75 (рабочие пропорции 1:5:3.) Кирпичной кладке можно также придать некий цвет, добавив в раствор сажу. При этом нужно учитывать, что большое количество сажи приводит к уменьшению прочностных характеристик цементного раствора.

Нередко возникает проблема, когда после внесения нужной пропорции воды в цементный раствор он очень сильно теряет в плотности массы. Для повышения вязкости такой смеси нужно добавить немного цемента и песка, сохраняя соотношение их частей.

Для работ по плиточной отделке оптимальный цементно-песчаный раствор соотношением 1:2,4:0,4. При выполнении таких работ важно контролировать плотность смеси. Сделать это весьма просто. Малый объем раствора выкладываем равным слоем на тыльную сторону плитки и пробуем его стряхнуть. Если после таких манипуляций на плитке остался слой толщиной больше 3 мм, то приготовленный высококачественный раствор. При полном отваливании смеси от поверхности стоит немного повысить ее плотность (просто добавить песок и цемент согласно выбранной пропорции). Также технологично правильно увлажнить рабочую сторону плитки цементным молоком (1 часть цемента к 3-4 частям воды).

Цементно-известковый раствор.

Для приготовления цементно-известкового раствора используются цемент и известь (вяжущие компоненты), песок (наполнитель), вода. Очень важно брать свежий цемент, поскольку при долговременном сбережении значительно ухудшаются его свойства. Так, например, после месяца хранения марка М500 понижается в характеристиках до М450. Причем, за полгода хранения цемент может утратить до ¼ своих полезных качеств. Фракция песка должна быть 3-5 мм. При этом подойдет как речной, так и карьерный песок. Например, для штукатурки песок с карьера предпочтительней, поскольку содержащаяся в нем примесь глины делает смесь намного мягче. Чтобы повысить упругость раствора нередко практикуют добавление клея ПВА в соотношении 0,5 л клея на 20 л рабочего раствора. Вместо клея добавлять можно жидкое мыло (0,2 л на 20 л раствора), пластификаторы.

Стоить отметить, что на соотношение компонентов цементно-известкового раствора влияет вид выполняемых работ. Например, штукатурить лучше цементным раствором с пропорцией 1:1:6 или 1:2:9.

Раствор кладочный цементный.

Значительно облегчает подсчет объема компонентов для цементного раствора и выбор соответствующей марки цемента специальные таблицы. Такие таблицы существуют и для приготовления песчано-цементного раствора с учетом типа грунта и их без проблем можно найти на просторах сети.

Таблица содержит соотношения компонентов для различных цементно-известковых растворов.

Для получения качественного кладочного цементного раствора оптимально использовать заранее просеянный песок. Просев на специальном строительном сите позволяет избавится от ненужных камней, грунта и прочих ненужных примесей.

Значительно облегчает процесс получения цементного раствора бетономешальные машины. Последовательность добавления компонентов в мешалку таков: сперва добавляем часть от нужного объёма воды, а дальше, последовательно, цемент и песок. В конце выливаем оставшуюся воду. Сам процесс смешивания длится не меньше 2 минут. По прошествии этого времени можно переливать раствор в ведро или другой рабочий сосуд. Нужно помнить, что цементный раствор быстро затвердевает, поэтому не стоить приготовлять очень большое его количество. Оптимально такое количество цементного раствора, которое можно израсходовать за несколько часов работы. И также не стоит забывать про периодичное перемешивание кладочного цементного раствора во избежании его расслоения.

Правильное соотношение песка и цемента при строительстве

В строительстве используется множество смесей: бетон для заливки фундамента, раствор для кладки, заливки полов, стяжки стен и т.д. Основой каждого из них является цемент и песок. От того, в каких пропорциях они будут добавлены, зависят свойства получившейся смеси.

Песок в строительных смесях используется в качестве наполнителя: он дешевый, поэтому снижает конечную стоимость материала. Кроме того, он делает раствор более прочным, повышает морозо – и влагоустойчивость. Отчасти благодаря песку цементное покрытие не трескается и не проседает.

Соотношения песка и цемента при строительстве зависит от:

  • Технических характеристик и назначение смеси;
  • Качества цемента.

Дальше рассмотрим, сколько необходимо добавлять песка в различных строительных смесях.

Растворы для кладки – сколько песка брать

Цементные растворы широко используются для кладки кирпича. В зависимости от характеристик их разделяют на марки:

  • М-0 и М-2 – используются очень редко;
  • М-75, М-25, М-3, М-10, М-50 – самые популярные для укладки кирпича;
  • М-100, М-150, М-200 – растворы для штукатурки, внутренних работ и отделки фасадов.

Для кладки используют раствор той же марки, что и строительный материал.

Для приготовления раствора чаще всего используются цемент М-300 и М-400, реже М-500. Сколько песка брать зависит от качества цемента. Пропорции для растворов, которые чаще всего применяются в строительстве, указаны в таблице.

Марка цементаМарка раствора
255075100150
М-5001:71:51:4
М-4001:71:5,51:41:3
М-3001:101:61:41:31:2,5

Для получения раствора смешивается песок и цемент, затем частями добавляется чистая холодная вода до получения нужной подвижности. Последнюю определяют с помощью специального конуса, погруженного в готовую смесь. Полнотелый кирпич лучше класть раствором с подвижностью 9-10 см, пустотелый – 7-8 см. Если работы ведутся в жаркую погоду, рекомендуется добиться подвижности в 12-14 см.

Приготовление раствора для стяжки пола

Цементная стяжка выступает в качестве основы под линолеум, паркет или любое другое напольное покрытие. Реже (в гаражах, погребах) может выступать самостоятельным покрытием. Как и в случае раствора для кладки, количество песка зависит от марки цемента. Чаще всего в этих целях используются марки выше М-400. Рекомендуемые пропорции, в зависимости от назначения раствора, указаны в таблице.

НазначениеМарка раствораПодвижностьСоотношение цемента к песку
Для покрытийМ-2004-51:3
М-3004-51:2,5
Для прослоек и заполнения швов в покрытиях из штучных материаловМ-1505-61:3
М-3005-61:2,5
Для стяжекМ-1505-61:3
М-2004-51:2,5

Для раствора М200 и М-300 желательно использовать цемент М-600.

Раствор для штукатурки

Зачастую оштукатуривание стен подразумевает нанесение на поверхность трёх слоёв раствора: обрызг, грунт, накрывка. Каждый из них должен обладать определёнными свойствами, поэтому целесообразно готовить специальную смесь для каждого слоя. В отличие от других растворов, помимо песка и цемента требуется добавлять гидратную известь. В таблице указаны рекомендуемые пропорции для каждого слоя штукатурки для приготовления 200 л раствора.

Ингредиенты
Вода, лПесок, л (кг)Гидратная известь, л (кг)Цемент, л (кг)
Обрызг51155 (248)34 (17)23 (30)
Грунт50159 (255)40 (20)18 (23)
Накрывка42127 (203)28 (14)19 (25)

В ряде случаев можно обойтись двумя слоями штукатурки, приготовленной без добавления извести:

  1. Грунт для выравнивания незначительных дефектов и изменения геометрии стен: 1 часть цемента М-400 и 3 части песка.
  2. Основной раствор для выравнивания: 1 часть цемента М-400 и 5 частей песка.

Предпочтительным вариантом является приготовление раствора с известью, так как он более эластичен и прост в работе. В обоих случаях лучше использовать мытый или карьерный песок.

Замешивать раствор необходимо в бетономешалке, при этом сначала в неё заливается вода, а потом добавляются цемент и наполнители.

Сколько песка нужно для бетона

Бетон используют для заливки фундамента, для приготовления следует использовать самый чистый песок – мытый или речной. Кроме песка в бетон добавляется щебень. Правильные пропорции указаны в таблице.

Если на улице тепло, в раствор нужно добавлять холодную воду, при минусовой температуре, напротив, подогретую до 40C°C для того, чтобы бетон успел схватиться до того, как вода в его составе замёрзнет.

Купить по оптовой цене песок, щебень гранитный, известняковый, гравий и щебень гравийный, керамзит, чернозем, плодородный грунт, торф, растительный грунт, соль техническая галит, пеноблок, газосиликатные блоки, керамзитобетонные блоки, кирпич, бетон и другие стройматериалы с доставкой по Москве и Московской области:

Андреевка, Апрелевка, Балашиха, Бронницы, Быково, Видное, Волоколамск, Воскресенск, Высоковск, Голицино, Дедовск, Дзержинский, Дмитров, Долгопрудный, Домодедово, Дорохово, Дрезна, Дубна, Егорьевск, Железнодорожный, Жуковский, Зарайск, Заречье, Зеленоград, Звенигород, Ивантеевка, Икша, Истра, Кашира, Киевский, Климовск, Красково, Краснозаводск, Клин, Королев, Красногорск, Коломна, Красноармейск, Котельники, Кубинка, Куровское, Лесной, Луховицы, Люберцы, Лыткарино, Лобня, Малаховка, Малино, Менделеево, Михнево, Монино, Московский, Можайск, Мытищи, Митино, Наро-Фоминск, Нахабино, Ногинск, Одинцово, Озеры, Орехово-Зуево, Павловский Посад , Подольск, Пушкино, Пущино, Реутов, Раменское, Руза, Свердловский, Северный, Селятино, Серебряные Пруды, Снегири, Сходня, Сергиев Посад, Серпухов, Солнечногорск, Софрино, Старая Купавна, Ступино, Талдом, Томилино, Троицк, Тучково, Фрязино, Химки, Хотьково, Черкизово, Черноголовка, Чехов, Шатура, Щелково, Щербинка, Электрогорск, Электроугли, Электросталь, Юбилейный, Яхрома и др.

Как правильно разводить цемент — пропорции смеси

Цемент – это востребованный стройматериал, используемый в процессе выполнения различных работ. Из него получается бетон, применяемый в процессе возведения или ремонта сооружений, при создании фундамента или иных объектов. Именно цемент выступает главным компонентом для формирования бетонного раствора. Поэтому надо точно знать, как правильно создать данную смесь, чтобы она обладала нужной консистенцией и однородностью. Итак, давайте рассмотрим, как правильно разводить цемент.

СОДЕРЖАНИЕ

Особенности использования цемента

Цемент – это специальное сцепляющее вещество, используемое для создания разных смесей или растворов. Наиболее часто изготавливается бетонный раствор, в состав которого входят компоненты:

  • подходящая марка цемента;
  • чистая вода;
  • разные наполнители, в качестве которых может использоваться песок или щебень.

Количество раствора, качество компонентов и их пропорции полностью зависят от того, для каких целей создается смесь, так как она может использоваться для кладки стен или для их оштукатуривания (чем штукатурить газобетон). Применяется она для заливки фундамента или иных аналогичных целей.

Основные правила создания качественного раствора

К основным правилам, используемым в процессе создания качественной смеси, относится:

  • допускается смешивать компоненты и заливать их водой в таре из металла или пластика;
  • размер емкости зависит от объема раствора, который надо получить в итоге;
  • первоначально смешиваются сухие компоненты, а именно песок и цемент, причем их заранее необходимо просеять через мелкое сито, чтобы в них полностью отсутствовали какие-либо крупные примеси и вкрапления;
  • далее добавляется в эту смесь чистая вода, причем желательно, чтобы она была холодной;
  • во время добавления воды необходимо смесь тщательно перемешивать, чтобы получилась оптимальная консистенция, похожая на сметану;
  • определить нужную густоту достаточно легко, так как смесь должна держаться на шпателе, и при этом нельзя, чтобы она стекала с него.

Полученный раствор обладает оптимальными параметрами в течение полутора часов, поэтому необходимо воспользоваться им по назначению в течение данного времени, а если этого сделать не получится, то придется делать новую смесь.

В каких пропорциях разводить цемент?

Правильные пропорции могут значительно отличаться для различных смесей. Поэтому перед замешиванием необходимо определиться, для каких целей будет применяться конкретный раствор.

Наиболее популярными растворами, для которых требуется цемент, являются:

  • Смесь для оштукатуривания стен. Для ее приготовления рекомендуется использовать 1 часть цемента и 3 части песка. Объем воды обычно равен части цемента, но ее нельзя добавлять сразу, поэтому она вливается в сухую смесь небольшими порциями, чтобы получить нужную консистенцию. Если нужно проводить внутренние штукатурные работы, то выбирается марки М150 или М200, а если планируется штукатурить фасад, то подойдет марка М300.
  • Раствор для кладки из кирпича. Здесь используется 1 часть цемента и 4 части песка. Оптимальными марками для этих работ считаются М300 и М400. Нередко в такую смесь добавляется еще гашеная известь, выступающая вяжущим компонентом. Ее количество рассчитывается как 0,2 части на 1 часть цемента. За счет данного вещества получается пластичный раствор, работать с которым достаточно легко и удобно. Количество воды может отличаться, так как она добавляется постепенно до того момента, пока не будет получен раствор нужной плотности. Важно сделать смесь, которая не будет стекать со шпателя, наклоненного под углом 40 градусов.

  • Смесь, предназначенная для создания стяжки пола. Обычно для нее используются пропорции: 1 часть цемента к трем частям песка. Оптимальной считается марка М400. Вода добавляется в объеме ½ от количества цемента. Чтобы сделать редкий раствор, рекомендуется постепенно добавлять воду, так как важно, чтобы смесь хорошо тянулась, что гарантирует заполнение всех пустот на основании.
  • Бетон. Для создания бетона используется 1 часть цемента, 2 части песка и 4 части гравия. Если делается этот раствор для формирования фундамента строения, то необходимо приобретать материал марки М500. Количество воды равно ½ от части цемента. Вода должна быть чистой и питьевой, а размешивать состав рекомендуется бетономешалкой (как выбрать бетономешалку для дома и дачи). Надо использовать весь раствор в течение часа после его получения.

Нередко приобретаются готовые растворы на заводе, а в этом случае надо убедиться, что смесь создается непосредственно перед отправкой заказчику. Перед покупкой изучаются все документы к смеси, чтобы знать, из каких компонентов она состоит, а также какими параметрами обладает.

Необходимо выбирать правильные марки материала для формирования различных растворов. Если смесь предназначается для создания кирпичной кладки, то можно пользоваться марками М50 или М100, а если требуется сделать фундамент, то желательно выбирать марки от М300 до М500. Чем выше марка материала, тем более прочным и надежным будет раствор.

Видео: как правильно замешивать цементный раствор

Разводить цемент можно с разными компонентами, причем их количество и назначение зависят от того, для каких целей будет применяться конечный раствор. Важно пользоваться только качественными и чистыми материалами, а также смешивать их в правильной последовательности. Рекомендуется для размешивания применять бетономешалку или строительный миксер, так как ручное замешивание не обеспечивает равномерного распределения всех компонентов. При грамотном следовании всем рекомендациям гарантируется получение качественного и оптимального раствора для конкретных целей. На этом все, надеемся данная статья — «Как правильно разводить цемент» была вам полезна.

Вода не всякая подойдет!

Вода – важный компонент для приготовления строительных растворов для возведения конструкций и отделки. Не секрет, что для затворения цемента подходит не любая жидкость, а соответствующая определенным требованиям. Мы расскажем, какой должна быть вода для бетонов и строительных растворов и почему нельзя использовать жидкость из любого водопроводного крана.

Проблема выбора источника

Бетонные и другие растворы на цементе отличаются прочностью готового изделия или покрытия. Это свойство обеспечивается особой структурой, которая образуется в результате гидратации и химических реакций компонентов смеси между собой. На характеристики материала оказывает воздействие минералогический состав раствора, который подбирается тщательным образом.

Влияние воды на марку бетона нельзя недооценивать – жидкость может как способствовать приобретению прочности и других проектных параметров, так и значительно их снизить из-за наличия таких компонентов в составе:

  1. Вода с минералами в избыточном или недостаточном количестве может снижать скорость твердения, итоговую прочность, препятствовать образованию молекулярных связей в структуре камня.
  2. Органические загрязнения (ил, плесневелые грибки) вредят бетону фактически и в перспективе: они мешают минеральным компонентам вступать в реакцию и качественно кристаллизоваться, со временем во влажной среде органика развивается и разрушает изделие по всему объему.

Соответственно, использовать можно только воду, которая соответствует государственным нормативам, то есть из водопроводов, но проверенных лабораторно: к сожалению, действительно хорошая жидкость доходит до потребителя редко из-за плохого состояния проводных магистралей. То же относится к промывке наполнителей и поливке молодого твердеющего бетона.

Стандарт

Качество воды для бетонов и растворов регламентирует специальный ГОСТ 23732-2011 «Вода для бетонов и строительных растворов. Технические условия». Документ устанавливает ограничения по наличию в среде минералов и химических соединений (таб. 1 ГОСТа):

ГОСТ подробно описывает, какая вода для бетона, а также критерии для оценки ее качества при предварительных испытаниях (таб. 3 настоящего стандарта):

При наличии удобного источника водопровода перед использованием ресурса проводят обязательный анализ и сравнивают полученные показатели со значениями из таб. №3. При их соответветствии вода поступает в работу для замеса бетона и продуктов на основе цемента.

Влияние химических соединений на качество бетона

В бетоне много воды – от 155 литров на 1 м 3 , в зависимости от фракции щебня, песка, ожидаемой марки камня. Жидкость взаимодействует с каждой песчинкой и пылинкой цемента, поэтому ее качество оказывает влияние на весь объем будущей конструкции. Как химические соединения в воде влияют на свойства бетона, если пренебречь установленными нормами ГОСТа?

  • Сахара и фенолы отсрочивают твердение бетона и сильно ухудшают его качество. Нормируемое содержание этих веществ – 10 мл/литр;
  • Нефтепродукты образуют водонепроницаемую пленку на частичках вяжущего;
  • Поверхностно-активные вещества (мыльные остатки) также обволакивают компоненты. В отличие от присадок-улучшителей, дают только замедление твердения;
  • Растворимые соли сульфат-ионов и хлор-ионов кристаллизуются в порах бетона, приводят к коррозии камня и арматуры. По этой причине воду из моря использовать категорически запрещено.

Сточные, болотные и речные воды использовать для затворения бетонов и цементов можно, но только после очистки и проверки санитарно-эпидемиологической станцией.

Количество воды

Водосодержание бетона часто застает врасплох обывателей: сколько жидкости нужно для замеса раствора оптимальной подвижности? Тем не менее, знать это нужно, ведь вода находится в теле конструкции долгое время – гидратация может происходить в течение нескольких месяцев, необходимо обеспечить нормальные условия для этого.

В сводной таблице представлен технологический расход воды на куб при производстве бетона:

От чего зависит расход воды в бетоне:

  • Фракция песка и щебня;
  • Марка цемента и его тип;
  • Ожидаемая марка бетона.

Объем воды в бетоне не должен превышать норму – в погоне за пластичностью можно легко потерять качество, избыток жидкости тормозит гидратацию цемента, а ожидаемую прочность бетон не наберет. Соответственно, добавлять ее при замесе сверх нормы нельзя.

Слишком малое водосодержание бетонного раствора не даст перемешать компоненты должным образом, а пластичность у такого будет минимальной.

Чтобы получить бетон с хорошей пластичностью и удобоукладываеомстью, используйте специальные пластификаторы!

Как правильно разводить цемент?

Цемент – это специальный строительный материал, выполняющий функцию «связующего» между компонентами бетона и цементного раствора различного назначения. В чистом виде цемент практически не используется. Исключение составляет технология упрочнения верхнего слоя бетонных конструкций, так называемое «железнение».

Во всех остальных вариантах применения, цемент размешивается в тех или иных пропорциях с наполнителем и затворителем. Поэтому, отвечая на многочисленные вопросы частных застройщиков, есть смысл в рамках этой статьи рассказать, как разводить цемент с песком, водой и другими компонентами.

Область применения цемента

Для лучшего понимая вопроса как правильно разводить цемент, следует указать основные способы использования этого уникального и незаменимого строительного материала:

  • Производство тяжелых и других видов бетона.
  • Приготовление кладочных растворов.
  • Приготовление штукатурных растворов разных видов.
  • Изготовление материала для создания скульптур, вазонов, кашпо и других декоративных изделий из бетона.
  • Производство тротуарной плитки, бордюров и брусчатки.

Если говорить в общем, применение цемента можно разделить на два основных вида:

  • Связующее для бетонов различных типов и назначения.
  • Связующее для растворов различных типов и назначения.

Далее мы рассмотрим различные форматы и нюансы использования универсального «связующего».

Пропорции портландцемента популярных марок для производства тяжелого бетона

Самый востребованный вид бетона при возведении жилых и промышленных зданий, а также самый востребованный материал для изготовления всех видов ЖБИ – это тяжелый бетон, приготовленный на основе портландцемента марок М400 и М500, новые маркировки: ЦЕМ I 32,5Н ПЦ и ЦЕМ I 42,5Н ПЦ соответственно.

Представляем вниманию читателей две таблицы, в которых вы найдете ответы на популярные вопросы: как разводить цемент для бетона используя марки М500 и М400.

Таблица пропорций компонентов для приготовления 1 м3 тяжелого бетона популярных марок прочности

Марка БетонаЦемент М400 ЦЕМ I 32,5
ПропорцииЦементПесокЩебеньВода
М1001:4,4:6,5:1,1175 кг755 кг1150 кг190 л
М1501: 3,5: 5,2: 1215 кг735 кг1140 кг
М2001: 3: 4,5: 0,7255 кг715 кг1125 кг
М3001: 2: 3,3: 0,6335 кг670 кг1105 кг
М4001: 1,5: 2,5: 0,5420 кг625 кг1085 кг
М5001: 1,2: 2: 0,4500 кг575 кг1065 кг
Марка БетонаЦемент М500 ЦЕМ I 42,5
ПропорцииЦементПесокЩебеньВода
М1001: 5: 7,3: 1,2160 кг770 кг1150 кг190 л
М1501: 4: 6: 1190 кг755 кг1140 кг
М2001: 3,3: 5: 0,8225 кг735 кг1125 кг
М3001: 2,5: 3,8: 0,7290 кг705 кг1105 кг
М4001: 2: 3: 0,5355 кг675 кг1085 кг
М5001: 1,5: 2,5: 0,4425 кг640 кг1065 кг

В таблице есть ответы на один из самых распространенных вопросов непрофессиональных застройщиков малоэтажных зданий – как развести цемент для фундамента дома, дачи или коттеджа.

В соответствии с действующими нормативными документами – ГОСТ и СНиП, оптимальным вариантом для заливки 99% фундаментов является марка тяжелого бетона М150 или М200. Для тяжелых условий эксплуатации допускается использовать марку бетона М400. Соответственно при стоящей задаче, как развести раствор цемента для заливки фундамента, следует воспользоваться пропорциями, приведёнными в данной таблице.

Многие непрофессиональные и неопытные застройщики задают вопрос – а можно ли разводить цемент без песка, применив в качестве замены этого материала имеющийся гранитный отсев или мелкий строительный мусор.

Ответ частного строителя с достаточным опытом возведения малоэтажных зданий и сооружений будет таким. Если предстоит возведение не сильно нагруженных конструкций, таких как: отмостка вокруг дома, садовая дорожка, площадка для сушки белья или одноэтажный дом из печного шлака, подземный погреб небольших размеров (2х2х2 метра) допускается отступление от существующих ГОСТ, в части замены песка мелким строительным мусором или мелким гранитным отсевом.

Пропорции для растворов

Все цементно-песчаные растворы делятся на три основных типа: материал для кладки кирпича (шлакоблока, пеноблока, ракушечника, инкерманского камня), раствор для штукатурки поверхностей и раствор для стяжки пола. Рассмотрим приготовления указанных растворов по порядку.

Как развести цемент для кладки кирпича? В строительстве используется два вида раствора:

  • Цементно-известковый материал, состоящий из портландцемента ЦЕМ I 32,5Н или ЦЕМ I 42,5Н, тщательно просеянного песка, воды и известкового теста. Это так называемый «теплый» раствор. Материал этого вида обладает отличной пластичностью и считается оптимальным для всех видов кирпичной кладки. Пропорции компонентов цемент: известь: песок: вода: 1 часть цемента, 0,8 части извести, 7 частей песка, 0,8 части воды. Сначала смешиваются сухие компоненты и известь, далее добавляется вода и все тщательно перемешивается до однородной массы. При необходимости количество воды увеличивают.
  • Цементный раствор. Состоит из портландцемента ЦЕМ I 32,5Н ПЦ или ЦЕМ I 42,5Н ПЦ, пески и воды. Характеризуется как «холодный, жесткий и малоподвижный». Пропорции компонентов: 1 часть цемента, 5 частей песка (для ЦЕМ I 32,5Н ПЦ) или 5,5частей песка (для ЦЕМ I 42,5Н ПЦ) и 1 часть воды. Порядок приготовления рабочего материала аналогичен порядку приготовления цементно-известкового раствора.

Как видим сделать кладочный раствор можно своими руками прямо на строительной площадке, главное соблюдать пропорции и тщательно перемешивать компоненты.

Как разводить цемент для штукатурки?

В общем варианте, для обычной штукатурки стен используют три вида цементно-песчаного раствора:

  • Марка 50. Рекомендуется использовать для финишной затирки. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 32,5Н: часть связующего, 6,3 части песка, 1,3 части воды. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 42,5Н: часть цемента, 7 частей песка, 1,5 части воды.
  • Марка М100. Рекомендуется для внутренней отделки. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 32,5Н: часть связующего, 4 части песка, 0,8 части воды. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 42,5Н: часть связующего, 4,5 части песка, 0,9 части вод.
  • Марка М150. Рекомендуется для оштукатуривания сырых помещений, фасадов и цоколей. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 32,5Н: часть связующего, 3 части песка, 0,6 части воды. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 42,5Н: часть связующего, 3,3 части песка, 0,7 части воды.

Если говорить о том, как правильно развести цемент с песком для штукатурного раствора, то здесь очень важны два момента. Первый момент – следует очень тщательно просеять песок. Размер ячейки сита для просеивания песка под приготовление грунтовочной штукатурки должен составлять от 2 до 3 мм и 1 мм для приготовления финишной штукатурки.

Второй момент – очень тщательное перемешивание сухих компонентов, соблюдение пропорций воды и последующее тщательное перемешивание до однородной массы.

Как развести цемент с песком пропорции для стяжки пола?

Для заливки стяжки пола используют следующие марки цементно-песчаного раствора: М150 и М200. Выбор марки раствора зависит от максимальной нагрузки. Далее мы расскажем, как развести цемент с песком для приготовления раствора М150 и М200, а читатель сам выберет подходящий вариант в зависимости от конкретных условий эксплуатации.

  • Раствор М150. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 32,5Н ПЦ: 1 часть цемента, 3 части песка, 0,6 части воды. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 42,5Н ПЦ: 1 часть цемента, 3,3 части песка, 0,7 части воды.
  • Раствор М200. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 32,5Н ПЦ: 1 часть цемента, 2,1 части песка, 0,5 части воды. Пропорции для портландцемента ЦЕМ I 42,5Н ПЦ: 1 часть цемента, 2,5 части песка, 0,6 части воды.

Что касается порядка операций, то он стандартный. Сначала смешивают сухие компоненты, потом добавляется вода и все тщательно перемешивается.

Как разводят белый цемент?

В завершение повествования стоит ответить на еще один распространенный вопрос: Если в качестве «связующего» используется белый цемент, как разводить бетон и растворы на его основе правильно?

Белый цемент применяют для создания цветных конструкций. Поэтому очень важно чтобы наполнители и затворитель не перебивали цвет бетона или раствора. Поэтому для приготовления бетонов и растворов на основе белого цемента следует использовать белый тщательно очищенный карьерный песок, чистейшую воду и чистый инструментарий: корыто, лист железа, ведра и бетономешалку.

%PDF-1.4 % 2509 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 2509 407 0000000016 00000 н 0000009930 00000 н 0000010110 00000 н 0000010155 00000 н 0000010348 00000 н 0000010540 00000 н 0000011208 00000 н 0000011376 00000 н 0000011450 00000 н 0000011563 00000 н 0000011713 00000 н 0000011834 00000 н 0000011879 00000 н 0000012037 00000 н 0000012219 00000 н 0000012351 00000 н 0000012396 00000 н 0000012536 00000 н 0000012710 00000 н 0000012844 00000 н 0000012889 00000 н 0000013011 00000 н 0000013206 00000 н 0000013332 00000 н 0000013377 00000 н 0000013507 00000 н 0000013688 00000 н 0000013852 00000 н 0000013897 00000 н 0000014068 00000 н 0000014238 00000 н 0000014365 00000 н 0000014410 00000 н 0000014537 00000 н 0000014703 00000 н 0000014860 00000 н 0000014905 00000 н 0000015072 00000 н 0000015254 00000 н 0000015417 00000 н 0000015462 00000 н 0000015609 00000 н 0000015773 00000 н 0000015942 00000 н 0000015986 00000 н 0000016107 00000 н 0000016296 00000 н 0000016439 00000 н 0000016483 00000 н 0000016638 00000 н 0000016808 00000 н 0000016940 00000 н 0000016984 00000 н 0000017117 00000 н 0000017294 00000 н 0000017338 00000 н 0000017510 00000 н 0000017675 00000 н 0000017719 00000 н 0000017891 00000 н 0000018066 00000 н 0000018115 00000 н 0000018274 00000 н 0000018453 00000 н 0000018587 00000 н 0000018636 00000 н 0000018761 00000 н 0000018810 00000 н 0000018951 00000 н 0000019000 00000 н 0000019049 00000 н 0000019098 00000 н 0000019274 00000 н 0000019323 00000 н 0000019372 00000 н 0000019509 00000 н 0000019558 00000 н 0000019691 00000 н 0000019740 00000 н 0000019789 00000 н 0000019838 00000 н 0000019979 00000 н 0000020028 00000 н 0000020169 00000 н 0000020218 00000 н 0000020354 00000 н 0000020403 00000 н 0000020452 00000 н 0000020501 00000 н 0000020550 00000 н 0000020599 00000 н 0000020705 00000 н 0000020754 00000 н 0000020803 00000 н 0000020853 00000 н 0000021027 00000 н 0000021207 00000 н 0000021257 00000 н 0000021429 00000 н 0000021548 00000 н 0000021598 00000 н 0000021792 00000 н 0000021910 00000 н 0000021960 00000 н 0000022116 00000 н 0000022166 00000 н 0000022321 00000 н 0000022371 00000 н 0000022420 00000 н 0000022470 00000 н 0000022589 00000 н 0000022639 00000 н 0000022689 00000 н 0000022872 00000 н 0000022922 00000 н 0000023058 00000 н 0000023108 00000 н 0000023260 00000 н 0000023310 00000 н 0000023509 00000 н 0000023653 00000 н 0000023703 00000 н 0000023854 00000 н 0000023904 00000 н 0000024060 00000 н 0000024110 00000 н 0000024322 00000 н 0000024467 00000 н 0000024517 00000 н 0000024654 00000 н 0000024861 00000 н 0000024991 00000 н 0000025041 00000 н 0000025091 00000 н 0000025141 00000 н 0000025307 00000 н 0000025357 00000 н 0000025407 00000 н 0000025457 00000 н 0000025593 00000 н 0000025643 00000 н 0000025785 00000 н 0000025835 00000 н 0000025885 00000 н 0000026012 00000 н 0000026062 00000 н 0000026255 00000 н 0000026449 00000 н 0000026584 00000 н 0000026634 00000 н 0000026819 00000 н 0000026934 00000 н 0000026984 00000 н 0000027155 00000 н 0000027296 00000 н 0000027346 00000 н 0000027491 00000 н 0000027541 00000 н 0000027684 00000 н 0000027734 00000 н 0000027920 00000 н 0000028079 00000 н 0000028129 00000 н 0000028275 00000 н 0000028453 00000 н 0000028591 00000 н 0000028641 00000 н 0000028779 00000 н 0000028959 00000 н 0000029112 00000 н 0000029162 00000 н 0000029308 00000 н 0000029450 00000 н 0000029500 00000 н 0000029550 00000 н 0000029704 00000 н 0000029754 00000 н 0000029804 00000 н 0000029854 00000 н 0000030012 00000 н 0000030062 00000 н 0000030112 00000 н 0000030162 00000 н 0000030322 00000 н 0000030372 00000 н 0000030538 00000 н 0000030588 00000 н 0000030748 00000 н 0000030798 00000 н 0000030848 00000 н 0000030898 00000 н 0000030948 00000 н 0000030998 00000 н 0000031121 00000 н 0000031171 00000 н 0000031301 00000 н 0000031454 00000 н 0000031504 00000 н 0000031554 00000 н 0000031604 00000 н 0000031654 00000 н 0000031844 00000 н 0000031894 00000 н 0000032038 00000 н 0000032088 00000 н 0000032248 00000 н 0000032298 00000 н 0000032426 00000 н 0000032476 00000 н 0000032526 00000 н 0000032576 00000 н 0000032750 00000 н 0000032864 00000 н 0000032914 00000 н 0000033085 00000 н 0000033213 00000 н 0000033263 00000 н 0000033313 00000 н 0000033363 00000 н 0000033413 00000 н 0000033554 00000 н 0000033604 00000 н 0000033777 00000 н 0000033919 00000 н 0000033969 00000 н 0000034145 00000 н 0000034305 00000 н 0000034355 00000 н 0000034508 00000 н 0000034558 00000 н 0000034608 00000 н 0000034658 00000 н 0000034708 00000 н 0000034874 00000 н 0000034924 00000 н 0000035084 00000 н 0000035221 00000 н 0000035271 00000 н 0000035447 00000 н 0000035607 00000 н 0000035657 00000 н 0000035810 00000 н 0000035860 00000 н 0000035910 00000 н 0000035960 00000 н 0000036117 00000 н 0000036167 00000 н 0000036317 00000 н 0000036367 00000 н 0000036417 00000 н 0000036467 00000 н 0000036517 00000 н 0000036567 00000 н 0000036762 00000 н 0000036906 00000 н 0000036956 00000 н 0000037097 00000 н 0000037292 00000 н 0000037430 00000 н 0000037480 00000 н 0000037616 00000 н 0000037797 00000 н 0000037946 00000 н 0000037996 00000 н 0000038124 00000 н 0000038310 00000 н 0000038446 00000 н 0000038496 00000 н 0000038616 00000 н 0000038812 00000 н 0000038931 00000 н 0000038981 00000 н 0000039102 00000 н 0000039299 00000 н 0000039418 00000 н 0000039468 00000 н 0000039589 00000 н 0000039767 00000 н 0000039894 00000 н 0000039944 00000 н 0000040072 00000 н 0000040252 00000 н 0000040396 00000 н 0000040446 00000 н 0000040595 00000 н 0000040775 00000 н 0000040939 00000 н 0000040989 00000 н 0000041125 00000 н 0000041303 00000 н 0000041435 00000 н 0000041485 00000 н 0000041620 00000 н 0000041771 00000 н 0000041821 00000 н 0000041963 00000 н 0000042013 00000 н 0000042155 00000 н 0000042205 00000 н 0000042255 00000 н 0000042305 00000 н 0000042355 00000 н 0000042500 00000 н 0000042550 00000 н 0000042696 00000 н 0000042746 00000 н 0000042911 00000 н 0000042961 00000 н 0000043129 00000 н 0000043179 00000 н 0000043229 00000 н 0000043279 00000 н 0000043329 00000 н 0000043379 00000 н 0000043544 00000 н 0000043594 00000 н 0000043731 00000 н 0000043781 00000 н 0000043831 00000 н 0000043881 00000 н 0000044047 00000 н 0000044097 00000 н 0000044147 00000 н 0000044197 00000 н 0000044348 00000 н 0000044398 00000 н 0000044543 00000 н 0000044593 00000 н 0000044741 00000 н 0000044791 00000 н 0000044927 00000 н 0000044977 00000 н 0000045117 00000 н 0000045167 00000 н 0000045217 00000 н 0000045267 00000 н 0000045421 00000 н 0000045471 00000 н 0000045616 00000 н 0000045666 00000 н 0000045716 00000 н 0000045766 00000 н 0000045816 00000 н 0000045866 00000 н 0000046033 00000 н 0000046083 00000 н 0000046251 00000 н 0000046301 00000 н 0000046448 00000 н 0000046498 00000 н 0000046651 00000 н 0000046701 00000 н 0000046867 00000 н 0000046917 00000 н 0000047053 00000 н 0000047103 00000 н 0000047258 00000 н 0000047308 00000 н 0000047455 00000 н 0000047505 00000 н 0000047665 00000 н 0000047715 00000 н 0000047876 00000 н 0000047926 00000 н 0000047976 00000 н 0000048026 00000 н 0000048076 00000 н 0000048126 00000 н 0000048176 00000 н 0000048327 00000 н 0000048377 00000 н 0000048520 00000 н 0000048570 00000 н 0000048717 00000 н 0000048767 00000 н 0000048911 00000 н 0000048961 00000 н 0000049104 00000 н 0000049154 00000 н 0000049291 00000 н 0000049341 00000 н 0000049489 00000 н 0000049539 00000 н 0000049678 00000 н 0000049728 00000 н 0000049895 00000 н 0000049945 00000 н 0000050087 00000 н 0000050137 00000 н 0000050279 00000 н 0000050329 00000 н 0000050472 00000 н 0000050522 00000 н 0000050572 00000 н 0000050708 00000 н 0000050758 00000 н 0000050884 00000 н 0000051013 00000 н 0000051063 00000 н 0000051113 00000 н 0000051291 00000 н 0000051341 00000 н 0000051518 00000 н 0000051568 00000 н 0000051618 00000 н 0000051668 00000 н 0000008436 00000 н трейлер ]>> startxref 0 %%EOF 2915 0 объект>поток xVklTE>3wso{˦@-M»-.l;ؖ—RtK [email protected] LX&$D%*gf3s|wd~

Технические характеристики (EOS M200)

Управление экспозицией Режим измерения Замер в реальном времени с датчиком изображения
384-зонный (24×16) замер
Фотосъемка • Оценочный замер (связанный со всеми точками автофокусировки)
• Частичный замер (прибл. 5,8% экрана, в центре)
• Точечный замер (прибл. 2,9% экрана, в центре)
• Центровзвешенный средний замер
Видеозапись Центровзвешенный средний и оценочный замер с датчиком изображения
* Автоматически устанавливается методом фокусировки
Диапазон измерения яркости Фотосъемка EV от –1 до 20 (при комнатной температуре, ISO 100)
Видеозапись EV от 0 до 20 (при комнатной температуре, ISO 100)
Затвор Фокальный затвор с электронным управлением
Скорость затвора 1/4000 сек.до 30 сек. (общий диапазон выдержек; доступный диапазон зависит от режима съемки), ручная выдержка, X-синхронизация при 1/200 с.
* Диапазон настройки отличается при видеозаписи
Режим съемки Основные режимы съемки: интеллектуальный автоматический режим, гибридный автоматический режим, специальный сюжет (Автопортрет, Портрет, Гладкая кожа, Пейзаж, Спорт, Крупный план, Еда, Ночной портрет, Ночная съемка с рук, Управление подсветкой HDR, Бесшумный режим), Творческие фильтры (Зернистый ч/б, Мягкий фокус, Эффект «Рыбий глаз», Эффект акварели, Эффект игрушечной камеры, Эффект миниатюры, Художественный стандарт HDR, Яркий художественный HDR, Художественный HDR полужирный, Художественное тиснение HDR)
Расширенные режимы съемки: Программа AE, затвор -приоритет AE, AE с приоритетом диафрагмы, ручная экспозиция
Запись видео: автоматическая экспозиция видео, ручная экспозиция видео
Чувствительность ISO (рекомендуемый индекс экспозиции) Фотосъемка Основные режимы съемки Чувствительность ISO устанавливается автоматически
Расширенные режимы съемки ISO Auto (автоматически устанавливается в пределах ISO 100–25 600), устанавливается вручную в пределах ISO 100–25 600 (с шагом 1/3 ступени), расширяется до H (эквивалентно ISO 51 200)
* С установленным приоритетом светлых тонов, минимальный предел будет ISO 200
Видеозапись [Автоэкспозиция видео] • Видео Full HD/HD: Автоматически устанавливается в пределах ISO 100–12800 с возможностью расширения до H (эквивалентно ISO 25600)
• Видео 4K: Автоматически устанавливается в пределах ISO 100–6400
[Ручная экспозиция видео] •Видео Full HD/HD: ISO Auto (автоматически устанавливается в пределах ISO 100–12800), устанавливается вручную в пределах ISO 100–12800 (с шагом 1/3 ступени), расширяется до H (эквивалентно ISO 16000/20000/25600)
• Видео 4K: ISO Auto (автоматически устанавливается в пределах ISO 100–6400), устанавливается вручную в пределах ISO 100–6400 (с шагом 1/3 ступени)
* При установленном приоритете светлых тонов минимальное ограничение будет составлять ISO 200
Настройки чувствительности ISO Макс. для Авто, расширение ISO
Компенсация экспозиции Фотосъемка ±3 ступени с шагом 1/3 ступени
Видеозапись ±3 ступени с шагом 1/3 ступени
Замок AE Фотосъемка Авто: применяется в покадровой автофокусировке с оценочным замером при достижении фокуса
Вручную: с кнопкой фиксации экспозиции
Видеозапись С кнопкой блокировки автоэкспозиции
Сенсорный затвор В наличии
Система привода Режим привода Покадровая съемка, серийная съемка, автоспуск: 10 сек./пульт дистанционного управления, Автоспуск: 2 сек., Автоспуск: Непрерывная съемка
Скорость серийной съемки Покадровый автофокус: макс. ок. 6,1 выстрела/сек.; Сервоавтофокусировка: макс. ок. 4,0 выстрела/сек.
* Скорость серийной съемки может быть ниже в зависимости от таких факторов, как выдержка затвора, величина диафрагмы, условия съемки, яркость, тип объектива, использование вспышки, температура, тип питания и уровень заряда батареи.
* Скорость серийной съемки с Servo AF может быть ниже в зависимости от условий объекта или используемого объектива.
Максимальный пакет JPEG, большой/высокий: прибл. 71 кадр
RAW: прибл. 13 снимков
C-RAW: прибл. 31 кадр
RAW+JPEG Большое/Высокое качество: прибл. 12 кадров
C-RAW+JPEG Большое/Высокое качество: прибл. 22 кадра
* Максимальная длина серии измерена с использованием карты памяти UHS-I емкостью 32 ГБ, соответствующей стандартам тестирования Canon.
* Максимальная длина серии зависит от условий съемки (таких как соотношение сторон, объект, марка карты памяти, чувствительность ISO, стиль изображения и пользовательские функции).
Вспышка Встроенная вспышка Выдвижная вспышка с ручным управлением
Ведущий номер Прибл. 5,0/16,4 (ISO 100, м/футы)
Охват вспышки: прибл. Угол обзора объектива 15 мм
Время перезарядки: прибл. 4 сек.
Вспышка замера Автоматическая вспышка E-TTL II
Компенсация экспозиции вспышки ±2 ступени с шагом 1/3 ступени
Замок FE В наличии
ПК-терминал Не предусмотрено
Управление вспышкой Настройки функции встроенной вспышки
Внешняя вспышка Speedlite Не поддерживается

Баланс комплексов интерлейкина (IL)-6, IL-6·растворимый рецептор IL-6 (sIL-6R) и IL-6·sIL-6R·sgp130 обеспечивает одновременную классическую и транс-сигнализацию

Abstract

Интерлейкин (IL-)6 является основным провоспалительным цитокином в семействе IL-6.Сигналы IL-6 через гликопротеин 130 (gp130) и мембраносвязанный или растворимый рецептор IL-6 (IL-6R), называемый классической или транс-сигнализацией, соответственно. В то время как воспаление запускает экспрессию IL-6, уровень которой в конечном итоге повышается до нанограмм/мл в сыворотке крови, растворимый IL-6R (sIL-6R) и растворимый gp130 (sgp130) конститутивно присутствуют в верхнем диапазоне нанограмм/мл. Расчеты, основанные на межмолекулярном сродстве, позволяют предположить, что системный ИЛ-6 немедленно захватывается комплексами ИЛ-6·sIL-6R и IL-6·sIL-6R·sgp130, что указывает на то, что sIL-6R и sgp130 образуют буферную систему, повышающую период полураспада IL-6 или ограничивает системную передачу сигналов IL-6.Однако этот сценарий не был экспериментально подтвержден. Здесь мы количественно определили комплексы IL-6·sIL-6R и IL-6·sIL-6R·sgp130 в широком диапазоне концентраций. Количества ИЛ-6, используемые в этом исследовании, отражают концентрации, обнаруженные во время активных воспалительных явлений. Наши результаты показали, что большая часть IL-6 свободна и не связана с sIL-6R или sgp130, что указывает на то, что уровень эндогенного sgp130 в кровотоке недостаточен для блокирования транс-сигнализации IL-6 через sIL-6R. Важно отметить, что добавление однодоменного антитела VHH6, которое специфически стабилизирует комплексы IL-6·sIL-6R, но не связывается с IL-6 или sIL-6R по отдельности, переводило свободный IL-6 в комплексы IL-6·sIL-6R. и усиленная транс-сигнализация, но не классическая передача сигналов, демонстрирующая, что эндогенный sIL-6R имеет, по крайней мере, потенциал для образования комплексов с IL-6.Наши результаты показывают, что, хотя высокие концентрации sIL-6R и sgp130 присутствуют в сыворотке человека, относительное соотношение свободного IL-6 и IL-6·sIL-6R допускает одновременную классическую и транс-сигнализацию.

Ключевые слова: цитокин, передача сигнала, интерлейкин 6 (IL-6), рецептор интерлейкина 6 (IL6R), гликопротеин, классическая передача сигналов, транс-сигнализация

Введение

Провоспалительный цитокин интерлейкин 6 (IL-6) ) 2 контролирует развитие хронических воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, астма или воспалительные заболевания кишечника.Он также участвует в сердечно-сосудистых заболеваниях, включая атеросклероз, а также в возникновении и прогрессировании опухолей (1). Ингибирование передачи сигналов IL-6 было успешно реализовано в клинике как мощная противовоспалительная стратегия. ИЛ-6 секретируется в ответ на инфекцию лейкоцитами, а также фибробластами, адипоцитами, кератиноцитами и эндотелиальными клетками и индуцируется другими цитокинами, включая ИЛ-1 или фактор некроза опухоли α (ФНОα). Для передачи сигнала IL-6 связывается с рецептором IL-6, не передающим сигнал (IL-6R), с последующим образованием комплекса с гликопротеином 130 корецептора, передающим сигнал (gp130).Передача сигналов IL-6 активирует нижестоящие сигнальные пути, такие как янус-киназы/преобразователи сигнала и активаторы транскрипции (Jak/STAT), каскад фосфатидилинозитол-3-киназы и каскад активируемой митогеном протеинкиназы посредством образования гомодимера gp130 (2). Важно отметить, что свободный IL-6 не имеет сродства связывания с gp130, что делает IL-6R обязательным для первоначального связывания IL-6 и последующей активации gp130 (3). В дополнение к мембраносвязанному IL-6R растворимая форма IL-6R (sIL-6R) продуцируется путем протеолитического отщепления и альтернативного сплайсинга (4,–6).Связывание IL-6 со связанным с мембраной IL-6R индуцирует классическую передачу сигналов через gp130, тогда как связывание IL-6 с sIL-6R индуцирует транс-передачу сигналов также через gp130. IL-6R в основном обнаруживается на гепатоцитах и ​​иммунных клетках, тем самым ограничивая количество клеток, на которые направлена ​​классическая передача сигналов IL-6. Классическая передача сигналов IL-6 индуцирует острофазовый ответ и, как считается, обладает гомеостатическим и противовоспалительным действием (7). Поскольку gp130 экспрессируется повсеместно, передача сигналов через sIL-6R может активировать практически все клетки организма.Транссигнальный путь IL-6 в основном регулирует провоспалительные реакции (7). Было показано, что растворимая форма gp130 (sgp130) специфически ингибирует передачу сигналов IL-6, в то время как классическая передача сигналов IL-6 в значительной степени не затрагивается (3, 8). Блокирование передачи сигналов было эффективным в различных доклинических моделях хронических и аутоиммунных заболеваний (7). Интересно, что в условиях с высоким молярным избытком sIL-6R по сравнению с IL-6 sgp130 также препятствует классической передаче сигналов IL-6 (8). Для селективной транс-сигнальной передачи IL-6 был создан дизайнерский цитокин, названный Hyper-IL-6.Он состоит из IL-6, соединенного с sIL-6R гибким пептидным линкером, и обладает в 100–1000 раз большей способностью индуцировать передачу сигналов, чем природные комплексы IL-6·sIL-6R (3). По сравнению с природными комплексами IL-6·sIL-6R, Hyper-IL-6 имитирует ситуацию, когда все молекулы IL-6 заключены в такие комплексы. Другим дизайнерским белком, применимым как для терапевтических применений in vivo, так и для экспериментов in vitro , является sgp130Fc, который был сконструирован путем димеризации двух внеклеточных доменов sgp130 с человеческим IgG1-Fc (3).

Гомеостатическое производство ИЛ-6 приводит к его уровню в плазме примерно 1–10 пг/мл (9, 10). Во время инфекции, воспалительных заболеваний или рака уровни IL-6 в сыворотке повышаются до нижнего диапазона нанограмм/мл. Фатальный сепсис может даже привести к гораздо более высоким концентрациям ИЛ-6 в диапазоне 100–1000 нг/мл (11). Важно отметить, что sIL-6R всегда присутствует в высоких концентрациях (25–75 нг/мл) в сыворотке человека, и эти уровни лишь умеренно увеличиваются во время воспаления в 2–3 раза (12,–14). Наконец, sgp130 обнаруживается в концентрациях от 100 до 400 нг/мл в сыворотке здоровых людей (12).

Сообщалось о различных значениях констант диссоциации ( K d ) для связывания IL-6 с sIL-6R в диапазоне от 0,5 до 34 нм (12, 15, 16). В зависимости от K d расчеты, основанные на межмолекулярном сродстве, показали, что некоторые или большинство системных IL-6 будут захвачены комплексами IL-6·sIL-6R или IL-6·sIL-6R·sgp130, что указывает на то, что sIL -6R и sgp130 составляют буферную систему для увеличения периода полужизни IL-6 в сыворотке и/или для ограничения системной передачи сигналов IL-6.Целью данного исследования было экспериментальное определение образования комплексов IL-6·sIL-6R и IL-6·sIL-6R·sgp130 в широком диапазоне концентраций и сравнение этих данных с расчетными количествами, основанными на K d . Для прямого количественного определения комплексов IL-6·sIL-6R мы использовали недавно выпущенный в продажу ELISA и разработали анализ преципитации sgp130Fc для оценки комплексов IL-6·sIL-6R·sgp130Fc.

Результаты

Специфическое определение образования комплексов IL-6·sIL-6R показало, что количества естественно образующихся комплексов IL-6·sIL-6R намного ниже рассчитанных теоретических значений

За последние 25 лет различные K d значения образования комплекса IL-6·IL-6R были описаны в диапазоне от 0.от 5 до 34 нм (12, 15, 16). На основании K d и уравнения, описанного Gaillard et al. (12), можно рассчитать теоретические соотношения комплексов IL-6·sIL-6R и свободного IL-6 для любой заданной концентрации. Чтобы можно было сравнить теоретические данные с экспериментально определенными комплексами IL-6·sIL-6R, мы определили K d наших рекомбинантных белков IL-6 и sIL-6R с помощью поверхностного плазмонного резонанса и составили 22 нм для IL. Комплексы -6·sIL-6R (иммобилизованный sIL-6R; рис.S1 А ). Хотя наше значение K d хорошо согласуется с недавно опубликованными значениями K d Адамса и др. (15) (15,4 нм для иммобилизованного sIL-6R и 34,2 нм для иммобилизованного IL-6), он значительно отличается от значений 0,5 и 0,9 нм K d , первоначально описанных Gaillard et al. (12) и Zohlnhöfer и др. (16). Zohlnhöfer и др. (16) измеряли K d путем определения связывания IL-6 с клетками HepG2, тогда как Gaillard et al. (12) также использовал поверхностный плазмонный резонанс. gp130 представляет собой аффинный преобразователь, приводящий к образованию высокоаффинного тройного комплекса IL-6·IL-6R·gp130 с K d в диапазоне 10 пм (17). Чтобы определить, обладает ли наш рекомбинантный IL-6 этим свойством, мы использовали клетки Ba/F3-gp130-IL-6R, которым требуется IL-6 в качестве стимула для пролиферации (18). Половина максимальной пролиферации Ba/F3-gp130-IL-6R была достигнута с 8,4 мкМ IL-6 (рис. S1 B ), что превосходно по сравнению с предыдущими сообщениями об использовании IL-6 и той же клеточной линии (18, –21).Несмотря на то, что наш IL-6, по-видимому, имеет более низкую аффинность связывания с IL-6R по сравнению с некоторыми более ранними сообщениями, анализ его биологической активности демонстрирует высокую специфичность и активность нашего рекомбинантного IL-6, а недавние данные Adams et al. . (15) очень точно соответствуют нашим результатам. Поэтому мы пришли к выводу, что K d , определенные в этом исследовании, являются подходящими.

Затем мы рассчитали теоретические количества комплексов IL-6·sIL-6R на основе физиологических концентраций IL-6 и sIL-6R в норме и при заболевании, используя наши K d 22 нм (адаптировано из Ref .12). Например, системное воспаление в конечном итоге приводит к концентрации IL-6 до 10 нг/мл (0,422 нм, молекулярная масса IL-6 23,7 кДа), что в сочетании с типичными уровнями эндогенного sIL-6R составляет около 50 нг/мл (0,97 нм). нм, молекулярная масса sIL-6R 51,5 кДа) даст 95,8% свободного IL-6 (0,404 нм) и 4,2% IL-6 (0,018 нм) в комплексах IL-6·sIL-6R (0,0175 нм) и 98,2% свободный sIL-6R (0,952 нм) (таблица S1). Наши ранее опубликованные экспериментальные данные, основанные на клеточной пролиферации и фосфорилировании STAT3 клеток Ba/F3-gp130, также показали, что для этих концентраций общее количество свободного IL-6 должно было быть выше 90% с менее чем 10% в IL-6. комплексы сИЛ-6Р (8).Для экспериментального определения комплексов IL-6·sIL-6R мы использовали недавно выпущенный в продажу комплекс IL-6·sIL-6R DuoSet ELISA от R&D Systems (Миннеаполис, Миннесота) (DY8139-05). Перед анализом образования комплексов с использованием IL-6·sIL-6R ELISA мы продемонстрировали, что ELISA специфически выявляет комплексы IL-6·sIL-6R, но не IL-6 или sIL-6R по отдельности ( A ). Затем мы объединили 25 (0,458 нМ), 50 (0,97 нМ) или 75 нг/мл (1,45 нМ) sIL-6R, отражающих физиологические уровни sIL-6R, с 1–1000 нг/мл (0.042 до 42,2 нм) ИЛ-6. Затем мы количественно определили комплексы IL-6·sIL-6R с помощью ELISA ( B ) и рассчитали полученные проценты свободного и комплексного sIL-6R ( C ). Расчет основан на молярных соотношениях IL-6 и sIL-6R в комплексе IL-6·sIL-6R (молекулярная масса 75,2 кДа) и описан в разделе «Экспериментальные процедуры». Неожиданно мы обнаружили, что ELISA способен количественно определять только комплексы IL-6·sIL-6R для концентраций IL-6, начиная с 10 нг/мл, что свидетельствует о том, что этот ELISA не подходит для обнаружения эндогенных комплексов IL-6·sIL-6R, поскольку ИЛ-6 обычно ниже 10 нг/мл даже при острых или хронических воспалительных состояниях (22,–25).Чувствительность ELISA составляет 78 пг/мл для стандартного белка. Мы смогли достичь этого предела обнаружения, используя стандартный белок, поставляемый R&D, который представляет собой слитый белок IL-6 и sIL-6R ( A ), что помогает объяснить более высокий предел обнаружения наших IL-6 и sIL. -6R смеси по сравнению со стандартным белком. Наши результаты показали, что даже при 87-кратном молярном избытке IL-6 (1000 нг/мл, 42,2 нМ) по сравнению с sIL-6R только максимум 13% sIL-6R связывался с IL-6·sIL-6R. комплексы ( C , Таблица S2, 25 нг/мл рекомбинантного sIL-6R (0.485 нм)). Этот результат резко контрастирует с рассчитанным процентом 65,5% sIL-6R, теоретически связанным в комплексах IL-6·sIL-6R при концентрациях 1000 нг/мл IL-6, с использованием K d из 22 нм (таблица S1). Кроме того, мы наблюдали, что для всех применяемых концентраций IL-6 в комплексах IL-6·sIL-6R присутствовало только около ∼0,16–2% IL-6, в зависимости от концентрации sIL-6R (таблица S3). Затем мы изменили экспериментальную установку и использовали три фиксированные концентрации IL-6 (1, 10 или 100 нг/мл) и возрастающие концентрации sIL-6R (1–1000 нг/мл) и количественно определили IL-6. · Комплексы sIL-6R с помощью ELISA ( D ).Для сравнения, только ограниченное количество sIL-6R было обнаружено в комплексе с IL-6, с максимумом для 25 нг/мл sIL-6 и 100 нг/мл IL-6, около 7% всех молекул sIL-6R были обнаружены в комплексе. связанный в комплексы IL-6·sIL-6R ( E , таблицы S4 и S5). Кроме того, в этой установке мы наблюдали, что даже при 4,5-кратном молярном избытке sIL-6R (1000 нг/мл, 19,4 нМ) по сравнению с IL-6 (100 нг/мл, 4,22 нМ) только максимум ~4% IL-6 был связан в комплексы IL-6·sIL-6R (таблицы S4 и S6). В заключение, наши данные с использованием рекомбинантного IL-6 и sIL-6R позволяют предположить, что количество естественно образованных комплексов IL-6·sIL-6R намного ниже расчетных теоретических значений, основанных на K d 22 нм.

Количественное определение комплексов IL-6·sIL-6R. A , валидацию IL-6·sIL-6R ELISA проводили с рекомбинантным IL-6 (0,078–5 нг/мл), sIL-6R (0,078–5 нг/мл) или IL-6·sIL Стандарт комплекса -6R (0,078–5 нг/мл). B , рекомбинантный человеческий IL-6 (1–1000 нг/мл) и sIL-6R (25, 50 или 75 нг/мл) смешивали, и комплексы IL-6·sIL-6R количественно определяли с помощью IL-6· sIL-6R ИФА. Показаны объединенные данные трех экспериментов. Столбики ошибок представляют S.D. C, процентное содержание sIL-6R, присутствующего в комплексах IL-6·sIL-6R, рассчитывали по B . Расчет основан на молекулярных массах ИЛ-6 (23,7 кДа) и sIL-6R (51,5 кДа), связанных в комплекс IL-6·sIL-6R (75,2 кДа, соотношение = ~1/3 IL-6 и 2/3 сИЛ-6Р). Например, 5 нг/мл IL-6/sIL-6R определяли комбинацией 100 нг/мл IL-6 и 50 нг/мл sIL-6R. Таким образом, комплекс состоит из 3,42 нг/мл sIL-6R и 1,58 нг/мл IL-6. Следовательно, 6,85% используемых sIL-6R и 1.57% использованного ИЛ-6 были связаны в комплекс ИЛ-6·sIL-6R. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. D, рекомбинантный человеческий sIL-6R (1–1000 нг/мл) и IL-6 (1, 10 или 100 нг/мл) смешивали, и комплексы IL-6·sIL-6R определяли количественно с помощью IL-6· sIL-6R ИФА. Объединенные данные были получены из трех независимых экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. E, процентное содержание sIL-6R, присутствующего в комплексах IL-6·sIL-6R, рассчитывали по D .

Образование комплекса IL-6·sIL-6R и передача сигналов усиливаются однодоменным антителом VHH6, нацеленным на соединительный эпитоп IL-6·sIL-6R

Затем мы проанализировали, Комплексы 6R могут быть стабилизированы недавно описанным однодоменным антителом VHH6.VHH6 специфически связывается с эпитопом, который охватывает соединение между IL-6 и sIL-6R, но не взаимодействует только с IL-6 или sIL-6R (15) ( A ). Важно отметить, что VHH6 не мешал обнаружению комплексов IL-6·sIL-6R с помощью ELISA и не давал перекрестных реакций в отсутствие IL-6·sIL-6R (фиг. S1, C и D ). Прежде всего, методом ИФА определяли оптимальную концентрацию VHH6 для максимальной стабилизации комплексов IL-6·sIL-6R. 0,1, 0,25, 0,5 или 1 нг/мл IL-6 комбинировали с 50 нг/мл sIL-6R плюс увеличивающиеся концентрации VHH6, демонстрируя, что концентрация выше 0.5 мкг/мл VHH6 не было обнаружено дальнейшего увеличения комплексов IL-6·sIL-6R ( B , фиг. S1 C ). Более того, добавление VHH6 увеличивало чувствительность обнаружения комплекса IL-6·sIL-6R примерно в 100 раз, начиная уже с 0,1 нг/мл IL-6 ( B , таблица S7). Наши расчеты показали, что до 50% IL-6 были вытеснены в комплексы IL-6·sIL-6R с помощью VHH6.

VHH6 способствует передаче сигналов IL-6 и образованию комплекса IL-6·sIL-6R. A, схематическая иллюстрация связывания VHH6 с комплексами IL-6·sIL-6R. B, рекомбинантный человеческий IL-6 (0,1–1 нг/мл) и sIL-6R (50 нг/мл) плюс возрастающие количества VHH6 (0,1 или 0,5 мкг/мл) смешивали, и образовался IL-6·sIL. Комплексы -6R количественно определяли с помощью IL-6·sIL-6R ELISA. Объединенные данные были из трех экспериментов. Планки погрешностей представляют С.Д. C, клеточная пролиферация клеток Ba/F3–gp130. VHH6 (0,01–30 мкг/мл) титровали в установке, в которой равное количество клеток культивировали в течение 3 дней без стимула с 10 нг/мл Hyper-IL-6 (HIL-6; контроль представляет собой 100% транс- сигнальный комплекс) или с комбинацией 10 нг/мл IL-6 и 10 нг/мл sIL-6R.Пролиферацию измеряли с помощью колориметрического анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Blue. Показан один репрезентативный эксперимент из трех. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. D, клеточная пролиферация клеток Ba/F3-gp130. ИЛ-6 (0,01–10 нг/мл) титровали в установке, в которой равное количество клеток культивировали в течение 3 дней с sIL-6R (10 нг/мл) или с комбинацией sIL-6R (10 нг/мл). ) и VHH6 (10 мкг/мл) или только HIL-6 (10 нг/мл). Пролиферацию измеряли с помощью колориметрического анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Blue.Показан один репрезентативный эксперимент из трех. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. E, клеточная пролиферация клеток Ba/F3-gp130-IL-6R. Равное количество клеток культивировали в течение 3 дней в присутствии HIL-6 (10 нг/мл) или VHH6 (10 мкг/мл) и возрастающих концентрациях IL-6 (0,005–10 нг/мл). Пролиферацию измеряли с помощью колориметрического анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Blue. Показан один репрезентативный эксперимент из трех. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. F, анализ активации STAT3 после передачи сигнала.Клетки Ba/F3-gp130 промывали три раза, голодали и стимулировали указанными количествами HIL-6, IL-6, sIL-6R и VHH6 в течение 10 мин. Готовили клеточные лизаты и на гели SDS наносили равные количества общего белка (50 мкг/дорожку) с последующим иммуноблоттингом с использованием антител против фосфо-STAT3 или STAT3 (контроль загрузки, те же образцы использовали на отдельных гелях). Данные вестерн-блоттинга показывают один репрезентативный эксперимент из трех. G, анализ активации STAT3 после классической передачи сигналов.Клетки Ba/F3–gp130–IL-6R трижды промывали, голодали и стимулировали указанными количествами IL-6 и VHH6 в течение 10 мин. Готовили клеточные лизаты и на гели SDS наносили равные количества общего белка (50 мкг/дорожку) с последующим иммуноблоттингом с использованием антител против фосфо-STAT3 или STAT3 (контроль загрузки, те же образцы использовали на отдельных гелях). Данные вестерн-блоттинга показывают один репрезентативный эксперимент из трех.

Для анализа эффектов VHH6 в клеточном анализе мы использовали IL-6- или IL-6·sIL-6R-индуцированную пролиферацию клеток Ba/F3-gp130-IL-6R или Ba/F3-gp130 соответственно. независимо оценить стабилизирующий эффект VHH6 на классическую и транс-сигнализацию.Пролиферация клеток Ba/F3-gp130 зависит от опосредованной IL-6·sIL-6R транс-сигнальной передачи, тогда как пролиферация клеток Ba/F3-gp130-IL-6R зависит от классической опосредованной IL-6 передачи сигналов (7). Прежде всего, мы продемонстрировали, что очень низкая пролиферация клеток Ba/F3-gp130, индуцированная комбинацией 10 нг/мл IL-6 и 10 нг/мл sIL-6R, сильно увеличивалась под действием VHH6 ( C ). . Интересно, что около 300 нг/мл VHH6 было достаточно для достижения максимальной пролиферации Ba/F3-gp130 ( C ).В другой экспериментальной установке с постоянными концентрациями sIL-6R (10 нг/мл) и VHH6 (10 мкг/мл) и увеличивающимися концентрациями IL-6 (от 0,01 до 10 нг/мл) VHH6 снижал минимальную концентрацию IL-6. необходимо для индуцирования клеточной пролиферации путем передачи сигналов от 1–3 (42,2–126 пм) до 0,03 нг/мл (1,2 пм) ( D ). Затем мы исследовали влияние VHH6 на классическую передачу сигналов. ИЛ-6 индуцировал пролиферацию клеток Ba/F3-gp130-IL-6R дозозависимым образом, достигая максимальной пролиферации при 1 нг/мл ИЛ-6 (полумаксимальная пролиферация при 0.2 нг/мл или 8,4 пм). Однако VHH6 оказывает небольшой, но значительный ингибирующий эффект на классическую передачу сигналов (E). Соответственно, VHH6 усиливал индуцированное передачей сигналов фосфорилирование STAT3 в клетках Ba/F3-gp130 ( F ), но не классическое фосфорилирование STAT3, вызванное передачей сигналов в клетках Ba/F3-gp130-IL-6R ( G ). Используя ImageJ для количественной оценки вестерн-блотов из трех независимых экспериментов, наши данные показывают, что увеличение pSTAT3, индуцированное VHH6 для транс-сигнализации IL-6, было значительным, тогда как VHH6 не оказывал такого влияния на классическую передачу сигналов (рис.S2, A и B ). Взятые вместе, эти данные показывают, что VHH6 стабилизировал комплексы IL-6·sIL-6R и усиливал транссигнальную передачу IL-6, но не оказывал усиливающего эффекта на классическую сигнальную передачу.

Обнаружение комплексов IL-6·sIL-6R в сыворотке крови человека с использованием рекомбинантного IL-6

После количественного определения комплексов IL-6·sIL-6R в стандартной буферной системе нашей следующей целью был анализ IL-6·sIL Комплексы -6R в сыворотке крови человека. Поэтому мы взяли кровь у 10 здоровых добровольцев и первоначально определили уровни IL-6, sIL-6R и sgp130.В то время как IL-6 и, как следствие, комплексы IL-6·sIL-6R были ниже предела обнаружения ИФА (<2 пг/мл для IL-6), уровни sIL-6R и sgp130 находились в диапазоне от от 36 до 69 нг/мл (52,9 ± 16,3 нг/мл) и от 205 до 330 нг/мл (243 ± 38,9 нг/мл) соответственно ( A ). Чтобы количественно определить количество комплексов IL-6·sIL-6R в этих образцах сыворотки, мы сравнили стандарты IL-6·sIL-6R, приготовленные в R&D Reagent Diluent, со стандартом, приготовленным в человеческой сыворотке. Важно отметить, что результаты измерения стандартной кривой, полученной в сыворотке крови, в среднем составили 8.в 3 раза ниже, чем при использовании R&D Reagent Diluent. Это убедительно свидетельствует о том, что сыворотка мешает ELISA-детектированию комплекса IL-6·sIL-6R и что поэтому эндогенные комплексы IL-6·sIL-6R в сыворотке будут обнаруживаться с сильно сниженной чувствительностью ( B ). Поэтому в последующих экспериментах мы построили стандартную кривую IL-6·sIL-6R в R&D Reagent Diluent и включили поправочный коэффициент (×8,3) для расчета комплексов IL-6·sIL-6R, измеренных в образцах сыворотки.Чтобы определить, какое количество комплекса IL-6·sIL-6R может образоваться в сыворотке человека, мы добавили рекомбинантный IL-6 в концентрациях от 1 до 1000 нг/мл к образцам сыворотки от 10 здоровых добровольцев и количественно определили IL-6·sIL-6. Комплексы 6R методом ИФА. Как и ожидалось, повышение концентрации IL-6 приводило к увеличению количества комплексов IL-6·sIL-6R ( C ). Процент sIL-6R, присутствующий в комплексах IL-6·sIL-6R, был ниже 1% для концентраций IL-6 ниже 25 нг/мл и до 15,24 ± 3,54% для 1000 нг/мл IL-6 ( D ; , таблица S2), что хорошо согласуется с нашими значениями, полученными с рекомбинантными белками в стандартном буфере.Также пропорции IL-6 или sIL-6R, связанные в комплексах IL-6·sIL-6R, были сопоставимы между образцами сыворотки и буферными условиями (таблицы S2 и S3).

Количественное определение комплексов IL-6·sIL-6R в сыворотке крови человека. A, Уровни IL-6, sIL-6R, sgp130 и комплексов IL-6·sIL-6R в сыворотке от 10 здоровых добровольцев определяли с помощью ELISA. Столбики представляют среднее значение ( средняя линия ) и С.Д. ( верхняя и нижняя строка ). B, Стандарт комплекса IL-6·IL-6R от R&D Systems восстанавливали либо в рекомендованном разбавителе, либо в сыворотке человека. Расчет поправочного коэффициента для обнаружения комплекса IL-6·sIL-6R в сыворотке (8,3 раза) проводили с объединенными данными трех независимых экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. C, рекомбинантный человеческий IL-6 (1–1000 нг/мл) титровали в образцах сыворотки от 10 здоровых добровольцев, и полученные комплексы IL-6·sIL-6R определяли количественно с помощью комплекса IL-6·sIL-6R. ИФА. Столбики представляют среднее значение ( средняя линия ) и С.Д. ( верхняя и нижняя строка ). D, , процентное содержание sIL-6R в комплексах IL-6·sIL-6R рассчитывали по C. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. E, рекомбинантный человеческий IL-6 (0,1–1 нг/мл) и VHH6 (0 или 1 мкг/мл) добавляли к образцам сыворотки от 3 здоровых добровольцев, и полученные комплексы IL-6·sIL-6R анализировали. определяют количественно с помощью ELISA комплекса IL-6·sIL-6R. Объединенные данные были из трех экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. F , рекомбинантный человеческий IL-6 (10 или 1000 нг/мл), VHH6 (1 мкг/мл) и эндогенный sIL-6R (0,5, 1, 2,5 или 5 нг/мл) в сыворотке трех человек. здоровых добровольцев смешивали, и комплекс IL-6·sIL-6R количественно определяли с помощью ELISA комплекса IL-6·sIL-6R. Объединены данные трех экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение.

Таблица 1

Обзор образования комплекса IL-6·sIL-6R на основе расчета K d (22 нм) или измерений ELISA для B и C

900 we исследовали, стабилизирует ли VHH6 также комплексы IL-6·sIL-6R в образцах сыворотки.1 мкг/мл VHH6 и от 0,1 до 1 нг/мл IL-6 добавляли к образцам сыворотки от 3 добровольцев, и полученные комплексы IL-6·sIL-6R количественно определяли с помощью ELISA. В то время как в отсутствие VHH6 комплексы практически не обнаруживались, добавление 1 мкг/мл VHH6 к 1 нг/мл IL-6 в сыворотке приводило к образованию около 4,2 нг/мл комплексов IL-6·sIL-6R. , демонстрируя, что практически все молекулы IL-6 были вытеснены в комплексы IL-6·sIL-6R под действием VHH6 (

E, Таблица S7). Это показало, что VHH6 также способен стабилизировать комплексы IL-6·sIL-6R в образцах сыворотки.

Чтобы проанализировать, какая часть эндогенного sIL-6R способна образовывать комплексы с рекомбинантным IL-6, мы разводили образцы сыворотки в PBS и доводили концентрации sIL-6R до 0,5, 1, 2,5 или 5 нг/мл. Затем к этим разбавленным образцам сыворотки добавляли 10 или 1000 нг/мл IL-6 в присутствии 1 мкг/мл VHH6. При 1000 нг/мл ИЛ-6 было обнаружено ~6,5 нг/мл комплексов ИЛ-6·sIL-6R в присутствии 5 нг/мл эндогенного sIL-6R, что позволяет предположить, что по крайней мере 89% сыворотки sIL-6R был способен связываться с IL-6 ( F ).В таблице S7 мы сравнили комплексы IL-6·sIL-6R, образованные с рекомбинантным IL-6 и sIL-6R, с комплексами, образованными с рекомбинантным IL-6 и эндогенным sIL-6R в присутствии и в отсутствие VHH6.

Эндогенный sgp130 может мешать обнаружению комплексов IL-6·sIL-6R в образцах сыворотки методом ELISA. Чтобы проанализировать это перекрестное ингибирование, мы добавили насыщающие количества sgp130Fc к рекомбинантным IL-6 и sIL-6R. Sgp130Fc представляет собой димеризованный слитый белок sgp130 и Fc-части антитела IgG1 и обеспечивает в 10 раз более высокую ингибирующую способность в отношении передачи сигналов по сравнению с природным мономерным sgp130.Важно отметить, что только комплексы IL-6·sIL-6R, но не IL-6 и sIL-6R по отдельности, могут связываться с sgp130Fc (3). Как показано в A , 1 мкг/мл sgp130Fc полностью предотвращал обнаружение рекомбинантных комплексов IL-6·sIL-6R с помощью ELISA для 1–1000 нг/мл IL-6 и 50 нг/мл sIL-6R. Затем мы использовали постоянные концентрации 100 нг/мл IL-6 и 50 нг/мл sIL-6R и увеличивающиеся количества sgp130Fc (5–10 000 нг/мл), чтобы непосредственно сравнить ингибирующее действие sgp130Fc на клеточную пролиферацию и на Обнаружение IL-6·sIL-6R с помощью ELISA.Мы выбрали эти концентрации IL-6 и sIL-6R, потому что они были достаточными, чтобы вызвать устойчивую пролиферацию клеток Ba/F3-gp130 ( B ). Пролиферация клеток Ba/F3-gp130, управляемая 100 нг/мл IL-6 и 50 нг/мл sIL-6R, ингибировалась примерно на 50% при 200 нг/мл sgp130Fc ( B ). Интересно, что обнаружение комплексов IL-6·sIL-6R с помощью ELISA было снижено на 50% при аналогичной концентрации sgp130Fc (100 нг/мл) ( C ), демонстрируя, что данные клеточной пролиферации и ELISA хорошо согласуются. .Показав, что уже 100 нг/мл sgp130Fc способны снижать обнаружение комплекса IL-6·sIL-6R на 50%, мы попытались количественно оценить влияние эндогенного sgp130 на обнаружение IL-6·sIL-6R. Для достижения этой цели мы удалили около 98% эндогенного sgp130 из сыворотки методом иммунопреципитации ( D ). Затем в сыворотку, обедненную и содержащую Sgp130, добавляли 50, 100, 200 или 1000 нг/мл IL-6, и комплексы IL-6·sIL-6R определяли количественно. В то время как мы не наблюдали количественной разницы в обнаружении комплекса IL-6·sIL-6R для 50 и 100 нг/мл IL-6, более высокие концентрации 200 и 1000 нг/мл IL-6 приводили к примерно 17 и 21% больше комплексов IL-6·sIL-6R обнаружено после истощения sgp130 ( E , таблица S8).Учитывая, что sgp130Fc примерно в 10 раз более эффективен, чем мономерный sgp130 (3), мы предсказали, что 40 нг/мл рекомбинантного sgp130Fc будут проявлять такую ​​же ингибирующую способность, как 400 нг/мл эндогенного sgp130 при обнаружении IL-6·sIL с помощью ELISA. -6Р комплексы. Как показано в C , 40 нг/мл sgp130Fc действительно эквивалентны 400 нг/мл эндогенного sgp130, поскольку он ингибирует обнаружение комплекса IL-6·sIL-6R примерно на 26%. Наши данные подтверждают, что эндогенный sgp130 способен связываться с комплексами IL-6·sIL-6R, тогда как количество эндогенного sgp130 в сыворотке, скорее всего, способно улавливать лишь меньшую фракцию IL-6·sIL-6R в IL-6R. 6·sIL-6R·sgp130 и, следовательно, не нейтрализует большинство эндогенных транс-сигнальных комплексов, как ожидалось ранее.

Влияние sgp130Fc на количественное определение комплексов IL-6·sIL-6R в сыворотке человека с помощью ELISA. A, рекомбинантный человеческий IL-6 (1–1000 нг/мл), sIL-6R (50 нг/мл) и sgp130Fc (0 или 1 мкг/мл) смешивали, и полученный IL-6·sIL-6R комплексы количественно определяли с помощью ELISA комплекса IL-6·sIL-6R. Показан один репрезентативный эксперимент из трех. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. B, клеточная пролиферация клеток Ba/F3-gp130. Равное количество клеток культивировали в течение 3 дней в присутствии HIL-6 (10 нг/мл) или IL-6 (100 нг/мл) плюс sIL-6R (50 нг/мл) и возрастающих концентрациях sgp130Fc (0.005–10 мкг/мл). Пролиферацию измеряли с помощью колориметрического анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Blue. Показан один репрезентативный эксперимент из трех. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. C, рекомбинантный человеческий IL-6 (100 нг/мл), sIL-6R (50 нг/мл) и sgp130Fc (5–10 000 нг/мл) смешивали и полученные комплексы IL-6·sIL-6R определяют количественно с помощью ELISA комплекса IL-6·sIL-6R. Объединены данные трех экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. D , эндогенный sgp130 был удален из сыворотки одного здорового добровольца путем иммунопреципитации с антителом против sgp130 и протеином A-сефарозой.Эндогенный sgp130 в сыворотке до и после преципитации количественно определяли с помощью ELISA sgp130. E, рекомбинантный человеческий IL-6 (50–1000 нг/мл) добавляли к эндогенному sIL-6R в естественной и обедненной sgp130 сыворотке одного здорового человека-добровольца, и производили количественный анализ полученных комплексов IL-6·sIL-6R. с помощью ELISA комплекса IL-6·sIL-6R. Объединенные данные были из трех экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение.

Таким образом, количество экспериментально определенного рекомбинантного и эндогенного sIL-6R, связанного в комплексы IL-6·sIL-6R, в целом было в 3-10 раз ниже расчетных теоретических значений, основанных на K d 22 нм () экспериментально определяют с использованием тех же рекомбинантных цитокинов.Это нашло отражение в примерно в 3 раза более высоком значении диссоциации K d (70,63 ± 11 нм), полученном из данных ELISA, рассчитанных из вспомогательной таблицы 2 с использованием значений IL-6 в пределах линейного диапазона (10, 25, 50). и 100 нг/мл).

Разработка стратегии определения количества комплексов IL-6·sIL-6R·sgp130

Поскольку sgp130 и sgp130Fc ингибируют обнаружение IL-6·sIL-6R с помощью ИФА, мы разработали альтернативную стратегию определения IL-6· Комплексы sIL-6R·sgp130 основаны на опосредованной протеином А-сефарозе преципитации комплексов IL-6·sIL-6R·sgp130Fc с последующим количественным определением оставшегося sIL-6R (присутствующего в виде свободного sIL-6R и в виде IL-6·sIL- 6R) в супернатанте с помощью ELISA.Эта процедура позволяет рассчитать количества sIL-6R, захваченных в комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130Fc ( A ). Мы использовали постоянные количества рекомбинантного sIL-6R (50 нг/мл, 0,97 нМ) и sgp130Fc (10 мкг/мл, 38,5 нМ, молекулярная масса ~260 кДа) плюс возрастающие концентрации IL-6 (1–200 нг/мл). , 0,0422–8,43 нм). Во-первых, мы подтвердили, что sIL-6R не связывается с sgp130Fc в отсутствие IL-6, путем количественного определения sIL-6R с помощью ELISA после преципитации sgp130Fc ( B ). После добавления возрастающих количеств IL-6 с последующим осаждением sgp130Fc в супернатанте с помощью ELISA обнаруживали пониженные концентрации sIL-6R.Осаждение около 90% sIL-6R было достигнуто при насыщающих концентрациях IL-6 (начиная с 50 нг/мл, 2,1 нМ, 2-кратный молярный избыток по сравнению с sIL-6R) и sgp130Fc. Интересно, что молярное соотношение IL-6 и sIL-6R 1:1 (25 нг/мл IL-6 = 1,05 нМ; 50 нг/мл sIL-6R = 0,97 нМ) приводило к осаждению примерно 60% Молекулы sIL-6R (, B и C , ). Причем в отсутствие sgp130Fc и при использовании одинаковых концентраций IL-6 и sIL-6R (оба по 50 нг/мл) только 3.24 ± 0,59% белков sIL-6R были обнаружены в комплексах IL-6·sIL-6R (таблица S2).

Количественное определение комплексов IL-6·sIL-6R·sgp130Fc. A, схематическая иллюстрация преципитации IL-6·sIL-6R·sgp130Fc гранулами протеина A-сефарозы и последующего анализа оставшегося sIL-6R в супернатанте. B , смешали рекомбинантный человеческий IL-6 (1–200 нг/мл), sIL-6R (50 нг/мл) и sgp130Fc (10 мкг/мл). Полученные комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130Fc осаждали протеином A-сефарозой и определяли количество sIL-6R в супернатанте с помощью ELISA.Объединенные данные были из пяти экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. C, процентное содержание sIL-6R в комплексах IL-6·sIL-6R·sgp130Fc рассчитывали на основе B. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. D , смешали рекомбинантный человеческий IL-6 (10–1000 нг/мл), sIL-6R (50 нг/мл) и sgp130Fc (0,04–10 мкг/мл). Полученные комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130Fc осаждали протеином A-сефарозой и количественно определяли sIL-6R в супернатанте с помощью ELISA. Среднее значение объединенных данных было получено из трех экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. E, рекомбинантный человеческий IL-6 (1–1000 нг/мл), эндогенный (сывороточный) sIL-6R и sgp130Fc (10 мкг/мл) смешивали. Полученные комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130Fc осаждали протеином A-сефарозой и количественно определяли sIL-6R в супернатанте с помощью ELISA. Использовали сыворотку 10 здоровых добровольцев. Среднее значение объединенных данных было получено из 10 измерений. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. F, процентное содержание эндогенного (сывороточного) sIL-6R в комплексах IL-6·sIL-6R·sgp130Fc рассчитывали по E.Столбики ошибок 90 239 представляют стандартное отклонение. G, рекомбинантный человеческий IL-6 (1–1000 нг/мл), эндогенный (сывороточный) sIL-6R, sgp130Fc (10 мкг/мл) и VHH6 (0 или 1 мкг/мл) смешивали. Комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130Fc осаждали протеином A-сефарозой и количественно определяли sIL-6R в супернатанте с помощью ELISA. Среднее значение объединенных данных было получено из трех экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение. Смешивали рекомбинантный человеческий IL-6 H, (1 или 2 мкг/мл), эндогенный (сывороточный) sIL-6R и sgp130Fc (10 или 20 мкг/мл).Полученные комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130Fc осаждали протеином A-сефарозой и количественно определяли sIL-6R в супернатанте с помощью ELISA. Преципитацию и количественное определение sIL-6R ELISA повторяли после второго добавления IL-6 (2000 нг/мл) и sgp130Fc (20 мкг/мл). Среднее значение объединенных данных было получено из трех экспериментов. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение.

Таблица 2

Количественное определение образования комплекса IL-6·sIL-6R·sgp130 из B и E

Прочерк (-) указывает на то, что эта концентрация не определялась.

Затем мы проанализировали, сколько комплексов IL-6·sIL-6R·sgp130 образовалось с 40 или 400 нг/мл sgp130Fc, используя преципитацию sgp130Fc через протеин A-сефарозу и последующее обнаружение sIL-6R с помощью ELISA. Как показано в D , 400 нг/мл sgp130Fc были столь же эффективны, как и 10 мкг/мл sgp130Fc для осаждения почти всех молекул sIL-6R в комплексах IL-6·sIL-6R·sgp130. В соответствии с данными, представленными в E , 40 нг/мл sgp130Fc были способны осаждать только около 30% IL-6·sIL-6R в комплексах IL-6·sIL-6R·sgp130, что опять-таки предполагает, что уровень эндогенный sgp130 не может полностью буферировать транс-сигнализацию.

Наконец, мы использовали образцы сыворотки тех же 10 здоровых добровольцев, как описано выше, для анализа образования комплекса IL-6·sIL-6R·sgp130Fc с эндогенным sIL-6R. Мы добавили 10 мкг/мл sgp130Fc и возрастающие количества IL-6 (1–1000 нг/мл) в образцы сыворотки, осадили комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130Fc и определили количество оставшегося sIL-6R в образцах сыворотки. супернатант. Самые высокие количества комплексов IL-6·sIL-6R·sgp130Fc в сыворотке наблюдались при 200 нг/мл или более IL-6. Неожиданно оказалось, что максимум 69% sIL-6R в сыворотке был переведен в комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130Fc (, E и F , ).Более того, добавление 1 мкг/мл VHH6 также не могло заставить более 69% sIL-6R образовывать комплексы IL-6·sIL-6·sgp130Fc (1000 нг/мл IL-6, 10 мкг/мл sgp130Fc) ( G ). Наши результаты свидетельствуют о том, что по крайней мере 30% сывороточного sIL-6R не способны связываться с sgp130Fc, хотя мы показали, что ~89% эндогенного sIL-6R способны образовывать комплексы с IL-6 ( F ). Чтобы исключить, что IL-6 и/или sgp130Fc не поступали в достаточных количествах, мы увеличили количество IL-6 (до примерно 260-кратного молярного избытка IL-6 по сравнению с эндогенным sIL-6R) и sgp130Fc для осаждения IL. -6·sIL-6R·sgp130Fc из сыворотки трех добровольцев, которые, однако, имели лишь скромный эффект и повышали преципитацию sIL-6R с 58% (при использовании 1000 нг/мл IL-6 (65-кратный молярный избыток ) и 10 мкг/мл sgp130Fc) до 61% (с использованием 2000 нг/мл IL-6 (130-кратный молярный избыток) и 20 мкг/мл sgp130Fc).Мы даже использовали ту же сыворотку, из которой в первом раунде было осаждено 61% sIL-6R, и провели второй цикл осаждения после еще одного добавления 2000 нг/мл IL-6 (~260 молярного избытка IL-6 над эндогенный sIL-6R) и 20 мкг/мл sgp130Fc. После второго осаждения в супернатанте все еще оставалось 32% исходного количества sIL-6R ( H ). Таким образом, наши результаты предполагают, что эндогенный sIL-6R не полностью доступен для связывания с sgp130Fc. В совокупности мы разработали надежный метод экспериментального определения количества комплексов IL-6·sIL-6R·sgp130.

Обсуждение

Довольно высокие эндогенные уровни sIL-6R и sgp130 в сыворотке обычно рассматриваются как системная буферная система, которая может либо способствовать передаче сигналов IL-6 путем образования комплексов IL-6·sIL-6R, либо ингибировать транс- передача сигналов через комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130 (7). В настоящее время неизвестно, сколько этих комплексов действительно присутствует in vivo . Первоначальные расчеты доли комплексов IL-6·sIL-6R были основаны на ранее опубликованной аффинности связывания ( K d ), равной 0.5 нм между IL-6 и sIL-6R. Они предсказали, что при низких и средних уровнях ИЛ-6 (0,001–10 нг/мл), которые характерны для здоровья (<10 пг/мл) или острых и хронических воспалений, большая часть ИЛ-6 должна быть захвачена ИЛ-6. ·комплексы сИЛ-6Р. В сочетании с опубликованными нормальными уровнями 50 нг/мл sIL-6R в сыворотке уровни 0,1 нг/мл IL-6 должны давать 66% общего количества IL-6, связанного в комплексах IL-6·sIL-6R, 1 нг/мл ИЛ-6 в 65%-ном комплексе ИЛ-6 и 10 нг/мл ИЛ-6 в 59%-ном комплексе ИЛ-6 (12). С другой стороны, наше и другое недавнее исследование не смогли воспроизвести это низкое сродство, и задокументированные значения K d находились в диапазоне от 14 до 34 нм (15).Важно отметить, что превосходная биологическая активность нашего рекомбинантного IL-6 приводила к сильной стимуляции клеток Ba/F3-gp130-IL-6R при очень низких дозах с полумаксимальной активацией IL-6 в 8,4 вечера, что хорошо согласуется с K d около 10 пм для аффинности комплексов IL-6·IL-6R к gp130 (17). Более того, если бы высокие соотношения комплексов IL-6·sIL-6R для низких концентраций IL-6, основанные на K d 0,5–0,8 нм (12, 16), были правдой, не было бы правдоподобного объяснения, почему комбинация свободного IL-6 и sIL-6R в 100-1000 раз менее эффективна для стимуляции пролиферации клеток Ba/F3-gp130 и фосфорилирования STAT3, чем слитый белок Hyper-IL-6 (18).Наши данные, представленные здесь, бросают вызов прогнозам, основанным на первоначально описанных значениях K d для IL-6 и sIL-6R, и показывают, что при концентрациях 10 нг/мл IL-6 и 50 нг/мл sIL-6R только ~1% IL-6 находится в комплексе с sIL-6R. Наши данные дополнительно объясняют низкую биологическую активность смесей IL-6·sIL-6R в отношении клеток-реципиентов, как было определено ранее (18). Важно отметить, что низкий уровень образования комплекса IL-6·sIL-6R был обнаружен не только для рекомбинантного sIL-6R, но также и для природного sIL-6R в сыворотке человека.Это показывает, что различия между рассчитанными и экспериментально определенными комплексами IL-6·sIL-6R не могут быть просто объяснены, например, . большая часть неактивного sIL-6R в наших препаратах рекомбинантного белка или другие структурные различия между рекомбинантным и природным sIL-6R, такие как характер гликозилирования или точный состав С-конца (обычно помеченный в рекомбинантном sIL-6R, но не помеченный и гетерогенные из-за генерации путем отщепления или альтернативного сплайсинга в природном sIL-6R).Более того, низкие количества комплексов IL-6·sIL-6R, обнаруживаемые с помощью ELISA, не были вызваны нарушением связывания эндогенного sgp130, поскольку мы экспериментально показали, что эндогенный sgp130 оказывает лишь незначительное влияние на обнаружение комплекса IL-6·sIL-6R.

Используя VHH6, однодоменное антитело, которое, как было показано, способствует образованию комплекса IL-6·sIL-6R (15), мы показали, что большинство белков IL-6 и sIL-6R действительно способны образовывать гетеродимерные комплексы. . VHH6 стабилизирует IL-6·sIL-6R таким образом, что диссоциация комплекса замедляется (15) и сдвигает образование комплекса от его нормального равновесия в сторону комплексов IL-6·sIL-6R.Биологическая активность этих VHH6-стабилизированных комплексов IL-6·sIL-6R была показана с помощью ELISA и по значительному усилению транс-сигналинга с точки зрения пролиферации и фосфорилирования STAT3 клеток Ba/F3-gp130. Интересно, что VHH6 не усиливает классическую передачу сигналов.

Молярный избыток рекомбинантного sgp130Fc эффективно ингибирует транс-сигнализацию IL-6, а также классическую передачу сигнала, хотя и только в том случае, если молярный уровень sIL-6R превышает уровень IL-6 (3, 8). Механизм действия sgp130, включая его влияние на классическую передачу сигналов, может иметь прямое значение для терапевтического применения sgp130Fc при IL-6-зависимых заболеваниях с документально подтвержденным молярным превышением sIL-6R над IL-6 (12, 26).Используя sgp130Fc для форсирования комплексов IL-6·sIL-6R в тройные комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130 с последующим осаждением и количественным определением оставшегося sIL-6R в супернатанте, мы продемонстрировали эффективность IL-6·sIL-6R. · образование комплекса sgp130Fc рекомбинантными белками и преципитация до 90% sIL-6R. По неизвестным причинам только около 70% эндогенного sIL-6R в сыворотке крови человека могли быть включены в комплексы IL-6·sIL-6R·sgp130Fc, хотя связывание эндогенного sIL-6R с IL-6 не нарушалось.

Как упоминалось выше, sIL-6R и sgp130 традиционно рассматриваются как системная буферная система, либо стимулирующая транс-сигнализацию IL-6 через комплексы IL-6·sIL-6R, либо ингибирующая транс-сигнализацию через IL-6·sIL-6R· комплексы sgp130 (7). В качестве альтернативы эти белки могут также образовывать временные комплексы, которые быстро связываются и диссоциируют, например, для увеличения периода полужизни IL-6 и обеспечения как классической, так и транс-сигнализации. Наши данные свидетельствуют о том, что эндогенные sIL-6R и sgp130 образуют только временные комплексы с IL-6.Следовательно, системная транс-сигнализация считается второстепенной из-за низкого количества циркулирующих комплексов IL-6·sIL-6R. То же верно и для рассмотрения эндогенного sgp130 как естественного ингибитора транс-сигналинга. Наши данные ясно показывают, что системные уровни эндогенного sgp130 далеко не достаточны для ингибирования передачи сигналов. Однако важно иметь в виду, что все наши расчеты и эксперименты были основаны на уровнях sIL-6R и sgp130, присутствующих в системном кровотоке.В настоящее время неизвестно, выше ли эти концентрации в локальных участках воспаления, где имеет место массовая продукция sIL-6R за счет протеаз-опосредованного выделения (27) и где также может присутствовать sgp130 в гораздо более высоких концентрациях из-за выделения (28). Особенно для паракринной и аутокринной транс-сигнализации даже небольших количеств комплексов IL-6·sIL-6R может быть достаточно для стимуляции gp130 на соседних клетках.

Таким образом, комплексы IL-6·sIL-6R и IL-6·sIL-6R·sgp130 формировались с гораздо более низкой частотой, чем предполагалось ранее, что оставляет больше места для классической, а не транс-сигнальной передачи даже в условиях, когда sIL -6R находится в большом молярном избытке по сравнению с IL-6.Более того, наши результаты убедительно подтверждают терапевтическое использование ингибиторов передачи сигналов с повышенной эффективностью, таких как оламкицепт, производное sgp130Fc, и его мутанты (29) при хронических воспалительных заболеваниях, поскольку только такие соединения с гораздо более высокой аффинностью связывания и ингибирующей способностью способны фактически блокировать патологическую транс-сигнализацию. Однако даже оламкицепт оставляет физиологическую транс-сигнализацию нетронутой (7).

Экспериментальные методики

Клетки и реагенты

Клетки Ba/F3 (ACC-300) были приобретены в Институте Лейбница DSMZ/Немецкая коллекция микроорганизмов и клеточных культур (Брауншвейг, Германия) и выращены в модифицированной Дульбекко среде Игла с высоким содержанием глюкозы питательная среда (GIBCO®, Life Technologies, Дармштадт, Германия) с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки (GIBCO®, Life Technologies), 60 мг/л пенициллина и 100 мг/л стрептомицина (Genaxxon Bioscience GmbH, Ульм, Германия) при 37 °C с 5% CO 2 .Генерация клеток Ba/F3-gp130 и Ba/F3-gp130-IL-6R была описана ранее (30). Клетки Ba/F3-gp130 поддерживали в присутствии 10 нг/мл человеческого Hyper-IL-6, слитого белка IL-6 и растворимого IL-6R, который имитирует транс-сигнализацию IL-6 (18). Клетки Ba/F3–gp130–IL-6R культивировали с 10 нг/мл человеческого IL-6. Hyper-IL-6, человеческий IL-6, sIL-6R и sgp130Fc экспрессировали и очищали, как описано ранее (3, 18, 31). Анализы контроля качества для этих рекомбинантных белков включали окрашенные серебром нативные гели и SDS-полиакриламидные гели, ELISA связывания с иммобилизованным sgp130Fc и анализы пролиферации клеток Ba/F3-gp130 в соответствии со стандартными процедурами производителя (CONARIS Research Institute AG, Kiel, Germany).VHH6 экспрессировали и очищали, как описано ранее (15). Антитела Phospho-STAT3 (Tyr-705) (D3A7) и STAT3 (124H6) были получены от Cell Signaling Technology (Франкфурт, Германия). Антитело α-human-gp130 (BR-3) было получено от Abcam (Кембридж, Великобритания). Анти-hIL-6R mAb 4–11 получали, как описано ранее (30). Биотинилированное антитело для обнаружения человеческого IL-6R (BAF227) было получено от R&D Systems. Вторичные mAb, конъюгированные с пероксидазой (номера 31432 и 31462), были получены от Pierce (Thermo Scientific, St.Леон-Рот, Германия). Комплекс IL-6·sIL-6R человека DuoSet ELISA (DY8139-05) и человеческий sgp130 DuoSet ELISA (DY228) были получены от R&D Systems. Набор для ELISA человеческого IL-6 (KHC0061) был получен от Invitrogen.

Расчет комплексов IL-6·sIL-6R и IL-6·sIL-6R·sgp130(Fc)

Стандарт комплекса 6R (R&D Systems) разводили в разбавителе реагентов R&D и сыворотке человека. Измерения показали, что стандартная кривая в сыворотке ниже примерно в 8 раз.3 по сравнению с кривой в Reagent Diluent. Поэтому мы решили умножить значения измерений комплексов IL-6·sIL-6R в сыворотке на 8,3. Количество связанного sIL-6R в комплексе IL-6·sIL-6R рассчитывали, исходя из молекулярных масс IL-6 и sIL-6R (IL-6, 23,7 кДа; sIL-6R, 51,5 кДа; IL-6). ·комплекс sIL-6R, 75,2 кДа). Например, если концентрация 5 нг/мл комплекса IL-6·sIL-6R получается в результате комбинации 100 нг/мл IL-6 и 50 нг/мл sIL-6R (молекулярное соотношение: ~1/3 ИЛ-6 (31,5%) и ~2/3 sIL-6R (68.5%) комплекса), в комплексе содержалось 5 нг/мл × 0,685 = 3,425 нг/мл sIL-6R, что соответствует 3,425 нг/мл на 50 нг/мл × 100 = 6,85% от общего количества sIL-6R. 6р. Аналогичным образом рассчитывали процентное содержание связанного IL-6.

Этическое одобрение для анализа IL-6·sIL-6R с использованием сыворотки здоровых добровольцев

Этическое одобрение для этого исследования было получено от институционального наблюдательного совета Университета Генриха Гейне (номер исследования 5829R). Все участники дали предварительное письменное информированное согласие.Периферическую кровь у здоровых добровольцев собирали путем венепункции. Сыворотку готовили с использованием пробирок для сбора крови Serum/CAT (BD Biosciences, номер 367819) в соответствии с инструкциями производителя. Все процедуры исследования на людях проводились в соответствии с принципами, изложенными в Хельсинкской декларации.

Иммуноферментный анализ

ELISA для человеческого IL-6R был описан ранее (30). Соответственно, планшеты для микротитрования покрывали мышиными mAb 4–11 против человеческого IL-6R (разбавленными до 1 мкг/мл в PBS) в течение ночи при комнатной температуре.После блокирования 5% сахарозой и 1% BSA в PBS добавляли образцы. Биотинилированное козье антитело против человеческого IL-6R BAF227 (R&D Systems) использовали в качестве детектирующего антитела с последующей инкубацией со стрептавидин-пероксидазой хрена (R&D Systems). Ферментативную реакцию проводили с использованием пероксидазного субстрата BM blue POD (Roche Applied Science, Мангейм, Германия) и считывали оптическую плотность при 450 нм на ридере Tecan Infinite M200 PRO (Tecan, Maennedorf, Швейцария). ELISA для комплекса IL-6·sIL-6R человека и sgp130, а также IL-6 (Invitrogen) выполняли в соответствии с инструкциями производителя.

Анализы пролиферации

Клетки Ba/F3-gp130 и Ba/F3-gp130-IL-6R промывали и культивировали по 5000 клеток каждой клеточной линии в течение 3 дней в конечном объеме 100 мкл с цитокинами или без них и/или ингибиторы. Пролиферацию клеточных линий Ba/F3 определяли через 72 ч после стимуляции цитокинами с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Blue® (Promega, Карлсруэ, Германия). Реагент CellTiter-Blue® использовали для оценки количества жизнеспособных клеток путем регистрации флуоресценции (возбуждение 560 нм, эмиссия 590 нм) с использованием планшет-ридера Infinite M200 PRO (Tecan) сразу после добавления 20 мкл реагента на лунку (момент времени 0) и через 60 мин после инкубации.Флуоресцентный сигнал реагента CellTiter-Blue® пропорционален количеству жизнеспособных клеток. Все значения были измерены в трех повторностях на эксперимент. Значения флуоресценции нормализовали путем вычитания значений, полученных в момент времени 0. Все эксперименты проводились не менее трех раз, и был выбран один репрезентативный эксперимент.

Измерения SPR

Для измерения кинетики взаимодействия между IL-6 и IL-6R мы применяли те же самые условия, как недавно сообщалось (15), путем иммобилизации IL-6 на чипе CM5 прибора BIAcore ×100 Plus (GE Healthcare, Фрайбург, Германия).Эксперимент проводили при 25 °C в буфере HBS-P + , содержащем 10 мМ HEPES, pH 7,4, 0,15 м NaCl, 0,05% (об./об.) поверхностно-активного вещества Р20 (GE Healthcare). Модель с одним циклом использовали для определения кинетических параметров взаимодействия IL6–IL6R. После иммобилизации ИЛ-6 на чипе СМ5 вводили ИЛ-6Р со скоростью потока 30 мкл/мин в возрастающих концентрациях (0–120 нМ). Ассоциацию IL-6 в каждой определенной концентрации отслеживали в течение 180 с, а общую диссоциацию измеряли в конце последней инъекции с периодом в 360 с.Данные были подобраны с использованием модели связывания 1:1.

Вестерн-блоттинг

Белки разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на поливинилидендифторидные мембраны. Мембраны блокировали и зондировали указанными первичными антителами (α-STAT3). После промывки мембраны инкубировали со стрептавидином-HRP или вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой, соответственно. Для обнаружения сигнала использовали реагенты Immobilon TM Western (Millipore Corporation, Billerica, MA) и ChemoCam Imager (INTAS Science Imaging Instruments GmbH, Göttingen, Germany).Контрольные блоты STAT3 (контроль загрузки) были получены с теми же образцами на отдельных гелях.

Иммунопреципитация sgp130Fc

sIL-6R (рекомбинантный или эндогенный) инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре с IL-6, затем добавляли 10 мкг/мл sgp130Fc при постоянном перемешивании. К образцам добавляли 50 мкл гранул протеина А-сефарозы (Roche Holding GmbH, Мангейм, Германия) на миллилитр с последующей инкубацией в течение 1 часа при постоянном перемешивании при комнатной температуре. После этого образцы центрифугировали (5 мин, 300× г , комнатная температура) и собирали надосадочную жидкость.Затем количество свободного sIL-6R, оставшегося в супернатанте, определяли с помощью ELISA на sIL-6R.

Иммунопреципитация эндогенного sgp130 из сыворотки крови

Для выделения эндогенного sgp130 из сыворотки крови человека 50 мкл гранул протеина А-сефарозы инкубировали с 0,5 мкг антитела α-человеческий gp130 (BR-3) (Abcam, Кембридж, Великобритания) в течение ночи при 4°C в 1 мл PBS. Несвязанное антитело удаляли центрифугированием (5 мин, 300 × г , 4°C). На миллилитр сыворотки использовали 50 мкл гранул α-человеческого CD130-связанного протеина А-сефарозы.Образцы инкубировали в течение 4 ч при 4°С при осторожном перемешивании. После этого образцы центрифугировали (5 мин, 300 × г, °С, 4°С) и из гранул протеина А-сефарозы выделяли сыворотку. Затем с помощью ELISA определяли оставшееся количество sgp130 и sIL-6R.

Программы и статистический анализ

Вестерн-блоты были проанализированы ImageJ (rsb.info.nih.gov/ij/). Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение. рассчитаны по крайней мере из трех независимых экспериментов, если не указано иное.Статистический анализ был выполнен с использованием двухфакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Бонферрони с использованием программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad, La Jolla, CA). p значения указаны как на цифрах: p ≤ 0,05 = *; р ≤ 0,01 = **; р ≤ 0,001 = ***; и р ≤ 0,0001 = ****.

AR-M200/201 Руководство по эксплуатации RU — Sharp

  • Стр. 2 и 3: В некоторых местах переключатель «ПИТАНИЕ» p
  • Стр. 4 и 5: 6 ФУНКЦИИ ПРИНТЕРА/СКАНЕРА ИСПОЛЬЗОВАНИЕ T
  • Стр. 6 и 7 : Меры предосторожности при обращении с аппаратом Be
  • Страницы 8 и 9: ВВЕДЕНИЕ Примечание Некоторые модели могут не иметь
  • Страницы 10 и 11: 1 2 3 Расширенные функции копирования •
  • Страницы 12 и 13: 1,2,3, 1,2 ,3, 1,2,3, 1,2,3, ПРЕПАРА
  • Страница 14 и 15: 1,2,3, 1,2,3, СП.FUNC CONNECTING T
  • Стр. 16 и 17: 2 Глава 2 ЗАГРУЗКА БУМАГИ Лоток
  • Стр. 18 и 19: ЗАГРУЗКА БУМАГИ 3 Аккуратно нажмите на бумагу
  • Стр. 20 и 21: ЗАГРУЗКА БУМАГИ Загрузка бумаги в
  • Стр. : 3 Глава 3 ИЗГОТОВЛЕНИЕ КОПИЙ Эта глава
  • Страницы 24 и 25: ИЗГОТОВЛЕНИЕ КОПИЙ
  • Страницы 26 и 27: 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3 , ИЗГОТОВЛЕНИЕ
  • Страница 28 и 29: 4 Глава 4 ФУНКЦИЯ УДОБНОГО КОПИРОВАНИЯ
  • Страница 30 и 31: 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, CONVENI
  • Страница 32 и 33: 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3,
  • Страница 34 и 35: 1,2,3, 1,2 ,3, ФУНКЦИЯ УДОБНОГО КОПИРОВАНИЯ
  • Страница 36 и 37: 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, CREATIN
  • Страница 38 и 39: 5 Глава 5 УСТАНОВКА ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ
  • Стр. 40 и 41: УСТАНОВКА ПРОГРАММНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ Примечание • Th
  • Стр. 42 и 43: УСТАНОВКА ПРОГРАММНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ 10 Вы будете
  • Стр. 44 и 45: УСТАНОВКА ПРОГРАММНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ Подключение
  • 90 731 Страница 46 и 47: УСТАНОВКА ПРОГРАММНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ 5 Нажмите кнопку
  • Страница 48 и 49: УСТАНОВКА ПРОГРАММНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ 5 Выберите «S
  • Страница 50 и 51: УСТАНОВКА ПРОГРАММНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ 6 Выберите «S
  • Страница 52 и 53:

    ИСПОЛЬЗОВАНИЕ Режим принтера Процедур

  • Page 54 и 55:

    Page 54 и 55:

    Printer / Scanner Функции Кнопка MA

  • Page 56 и 57:

    7 Глава 7 Настройки пользователя У пользователя

  • Page 58 и 59:

    Настройки пользовательских настроек № 13 14

  • Страница 60 и 61:

    НАСТРОЙКИ ПОЛЬЗОВАТЕЛЯ Режим печати Программа nu

  • Страница 62 и 63:

    НАСТРОЙКИ ПОЛЬЗОВАТЕЛЯ Звуковые сигналы (кнопка

  • Страница 64 и 65:

    , 1,2,3 , 1,2,3, 1,2,3, СЧЕТ

  • Страница 66 и 67:

    1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, 1,2,3, СЧЕТ

  • стр. 68 и 69:

    1,2,3, 1,2,3, КОПИРОВАНИЕ ПРИ ПРОВЕРКЕ

  • стр. 70 и 71:

    ПОИСК НЕИСПРАВНОСТЕЙ И ОБСЛУЖИВАНИЕ Ind

  • стр. 72 и 73:

    Устранение неисправностей и обслуживание Pro

  • Page 74 и 75:
  • Page 74 и 75:
  • Page 74 и 75:

    Устранение неисправностей и обслуживание Pro

  • 9073 Page 76 и 77:

    Устранение неисправностей и техническое обслуживание PLU

  • Page 78 и 79:

    Удаление несчастья при запуске OCTU

  • Page 80 и 81:
  • Устранение неисправностей и обслуживание 2 г

  • Page 82 и 83:

    Замена картриджа с тонером, когда до

  • Page 84 и 85:
  • Устранение неисправностей и обслуживание 6 7

  • Page 86 и 87:

    Очистка Машина надлежащая уход

  • Page 88 и 89: 10 Глава 10 Дополнительное оборудование SY

  • Page 90 и 91:

    Дополнительное оборудование с использованием AR-D33

  • Page 92 и 93:

    Приложение System Developer Sy

  • Стр. 94 и 95:

    ПРИЛОЖЕНИЕ Сканер Функция Тип Сканирование

  • Стр. 96 и 97:

    94 УКАЗАТЕЛЬ Символы Клавиша [ ]………..

  • Стр. 98 и 99:

    R Индикатор готовности ……………..

  • Стр. 100 и 101:

    БЕЗОПАСНОСТЬ МАТЕРИАЛА Панедия данных: 1

  • Page 10732
  • Page 10732
  • Page 10732
  • Page 10732
  • Page 107 и 103:

    Page 102 и 103:

    Паспорт данных материала Безопасность Страница: 3

  • Page 104 и 105:

    Паспорт данных безопасности материалов: 1

  • Page 106 и 107:

    Паспорт безопасности материалов Страница : 3

  • Страница 108 и 109:

    A. Информация об утилизации для пользователя

  • Страница 110 и 111:

    ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ КЛАСС 3B INVISIBLE LASER RA

  • 10D Printer Charger с уникальным зарядным устройством Zor Voltax 3

    Metafora, коллектив итальянских дизайнеров, осознает преимущества 3D-печати для своего бизнеса и внедряет ее в различные проекты.Группа дизайнеров недавно разработала прототип универсального зарядного кабеля для австралийской компании Volta Charger. Volta Spark, как называется проект, сочетает в себе практичность и премиальный внешний вид. Чтобы воплотить этот проект в жизнь, создатели Metafora использовали Zortrax M200 Plus на начальных этапах процесса проектирования и полимерный УФ-3D-принтер Zortrax Inkspire для ЖК-дисплея при тестировании окончательного прототипа зарядного устройства. Так выглядит прототип и конечный продукт.

    Прототип Volta Spark, напечатанный на 3D-принтере Inkspire (слева) и конечный продукт (справа).

    Проектирование и 3D-печать прототипов

    Рабочий процесс, шаг 1: цифровое проектирование

    Сначала дизайнеры делают около двадцати версий кабеля в программе для 3D-моделирования. Принтер Zortrax M200 Plus LPD работает быстро и легко, что позволяет команде, ответственной за зарядное устройство Volta, печатать столько версий дизайна, сколько им нужно, за короткий период времени и, самое главное, с низкими затратами.Это существенно облегчает процесс внесения любых желаемых изменений в проект. Как подчеркивает Симоне Альборгетти, дизайнер Metafora, «здесь крайне важна возможность протестировать продукт несколько раз. Благодаря использованию 3D-принтера мы можем видеть как 3D-печатные продукты, так и визуализацию — оба аспекта одинаково важны. Когда вы видите 3D-печатные продукты, вы можете понять эргономику, пропорции».

    Перед началом процесса печати модель кабеля нарезается в Z-SUITE.

    Шаг 2 рабочего процесса: 3D-печать

    После того, как различные версии дизайна будут готовы, их необходимо загрузить в Z-SUITE, программное обеспечение, которое Zortax поставляет со всеми предлагаемыми принтерами. Здесь цифровые модели нарезаются слой за слоем и подготавливаются к процессу 3D-печати. В случае проекта зарядного устройства Volta компания Metafora Design решила применить высоту слоя 0,09. Что касается используемых материалов, они выбирают Zortrax Z-HIPS и Z-PLA Pro, поскольку они нацелены на максимальную точность отделки.Прочитав спецификацию каждого материала, дизайнеры пришли к выводу, что Z-HIPS и Z-PLA Pro лучше всего подходят для их нужд. Что касается окончательного прототипа, напечатанного на Inkspire, выбранный материал — Zortrax RESIN Basic Grey.

    Окончательный прототип универсального зарядного кабеля, напечатанный на Inkspire с использованием Zortrax Resin BASIC Grey.

    После снятия опор отпечатки не нуждаются в дальнейшей постобработке — создателей вполне устраивают «сырые» варианты моделей.После сравнения множества физических предметов разных размеров и деталей и проверки их на точность, Metafora Design теперь может выбрать окончательный прототип. Выбор диктуется в основном деталями, которые, по мнению основателя коллектива «Метафора», делают или ломают данный проект. «Кабель просто должен иметь провод и верхнюю часть, поэтому большинство из них очень похожи. Это детали, которые делают работу здесь. Можно не знать всего о дизайне, но точно видно, какой кабель дешевый, а какой премиум.Все дело в деталях». Детали, столь важные для Volta Spark, неудивительно, что Inkspire был выбран для окончательного прототипа, поскольку он известен своей превосходной точностью и высоким качеством печати.

    Два варианта кабельных наконечников Volta Spark на платформе сразу после того, как Inkspire завершил процесс печати.

    Превращение прототипа в целевой проект

    Шаг 3 рабочего процесса: выбор целевых материалов

    На этом этапе дизайнеры занимаются окончательной разработкой Volta Spark.Они следят за тем, чтобы он выполнял свое назначение и соответствовал требуемым промышленным стандартам. Ключевой особенностью, отличающей Volta Spark от всех остальных зарядных устройств, является его способность заряжать множество различных устройств. Поэтому создатели оснастили один конец зарядного устройства открытым магнитом. С помощью одного из трех специальных наконечников этот открытый конец можно превратить в зарядное устройство USB-C, Lightning или Micro USB. Чтобы обеспечить высокое сопротивление и долговечность зарядного кабеля, в проекте использовались материалы военного класса, такие как сверхпрочный нейлон, не спутывающийся.«Volta Spark может заряжать любое устройство. Он совместим с Apple MacBook Pro, iPhone, Samsung Galaxy, Google Pixel XL или любыми устройствами micro USB. Представьте себе, один кабель, который заряжает каждое ваше устройство! Более того, он рассчитан на длительное время. По сути, это самый прочный универсальный кабель, доступный в настоящее время на рынке!», — подчеркивают дизайнеры «Метафоры».

    Различные подсказки в Volta Spark позволяют пользователям заряжать любое устройство, например. Apple MacBook Pro, iPhone, Samsung Galaxy, Google Pixel XL и устройства micro USB.

    Конечно, Volta Spark облегчит жизнь многим.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.